常用的酶和常用的底物有哪些？為了幫助檢驗(yàn)職稱考生了解，助力檢驗(yàn)職稱考生復(fù)習(xí)，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)為大家整理如下：

常用的酶

1.辣根過氧化物酶（HRP）：目前酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中應(yīng)用最廣泛的標(biāo)記用酶。由無色的糖蛋白（主酶）和亞鐵血紅蛋白（輔基）結(jié)合而成的復(fù)合物。輔基是酶活性基團(tuán)，而主酶則與酶活性無關(guān)，HRP的純度用RZ（HRP分別在403nm和275nm處的吸光度比值）表示，RZ值應(yīng)大于3.0。

RZ值僅說明血紅素基團(tuán)在HRP中的含量，并非表示HRP制劑的真正純度，而且RZ值高的HRP并不意味著酶活性也高，RZ值與酶活性無關(guān)。

酶活性以單位U表示：即1分鐘將1μmol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量。酶變性后，RZ值不變但活性降低，因此使用酶制劑時(shí)，酶活性單位比RZ值更為重要。

2.堿性磷酸酶（AP）：大腸桿菌來源的AP分子量80kD，酶作用最適pH為8.0；小牛腸黏膜AP分子量為100kD，最適pH為9.6；后一種AP的活性高于前者。

3.β-半乳糖苷酶（β-Gal）：β-Gal來源于大腸桿菌。因人血中缺乏此酶，以其制備的酶標(biāo)志物在測定時(shí)不易受到內(nèi)源性酶的干擾，從而提高特異性，被用于均相酶免疫測定。

常用的底物 

1.HRP的底物

（1）鄰苯二胺（OPD）：是HRP最為敏感的色原底物之一。OPD在HRP的作用下顯橙黃色，加強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長。OPD應(yīng)用液穩(wěn)定性差，易變色，需新配制后在1小時(shí)內(nèi)使用，顯色反應(yīng)過程需避光，而且具有致癌性。

（2）四甲基聯(lián)苯胺（TMB）：TMB經(jīng)HRP作用后變?yōu)樗{(lán)色，加入硫酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色，最大吸收峰波長450nm。TMB穩(wěn)定性好，成色無需避光，無致突變作用，是目前ELISA中應(yīng)用最廣泛的底物。缺點(diǎn)是水溶性差。

（3）其他：5-氨基水楊酸（5-ASA）和2，2-聯(lián)氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（ABTS）。

2.AP的底物

常用對-硝基苯磷酸酯（p-NPP），p-NPP經(jīng)AP作用后的產(chǎn)物為黃色對硝基酚，最大吸收峰波長為405nm。

3.β-半乳糖苷酶（β-Gal）的底物

常用4-甲基傘酮基-R-D半乳糖苷（4-MUU），酶作用后，生成高強(qiáng)度熒光物4-甲基傘形酮（4-MU），其敏度性較HRP高30～50倍，但測量時(shí)需用熒光計(jì)。

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