生物色譜法（Biochromatography）是20世紀(jì)80年代中后期問世，由生命科學(xué)與色譜分離技術(shù)交叉形成的一種極具發(fā)展?jié)摿Φ男屡d色譜技術(shù)。它利用藥物產(chǎn)生效應(yīng)（或毒性）一般是通過藥物與靶點(diǎn)即生物大分子包括受體、通道、酶等結(jié)合的原理，應(yīng)用于藥物活性成分的篩選、藥物作用機(jī)理的研究。它使效應(yīng)成分的分離與篩選結(jié)合在一起，進(jìn)而探討藥物的作用機(jī)理，是化學(xué)成分－效應(yīng)－作用機(jī)理聯(lián)動(dòng)的一種藥物研究方法，尤其適合于天然藥物效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)的研究，其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)為其展示了光明的發(fā)展前景。

　　現(xiàn)代生命科學(xué)已闡明了細(xì)胞、細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)組成，并逐步了解了酶、受體、抗體、傳輸?shù)鞍住NA、肝微粒體等在生命活動(dòng)中所起的重要生理作用。若將這些活性生物大分子、活性細(xì)胞膜、甚至活細(xì)胞作為配體固著于色譜擔(dān)體上，制成一種生物活性填料，用于現(xiàn)代色譜分析技術(shù)，形成一種能夠模仿藥物與生物大分子、靶體或細(xì)胞相互作用的色譜系統(tǒng)，這樣藥物與生物大分子、靶體間的相互作用就能用色譜中的各種技術(shù)參數(shù)定量表征，我們就可以方便地研究藥物與生物大分子、靶體或細(xì)胞間的特異性、立體選擇性等相互作用，篩選活性成分，揭示藥物的吸收、分布、活性、毒副作用、構(gòu)效關(guān)系、生物轉(zhuǎn)化、代謝等機(jī)理，探討藥物間的競爭、協(xié)同、拮抗等相互作用。

　　因此，建立中藥生物色譜技術(shù)，可以模擬生理或病理狀態(tài)下藥物在體內(nèi)進(jìn)行生物活性表達(dá)的一些關(guān)鍵步驟，將中藥或中藥復(fù)方中的效應(yīng)物質(zhì)進(jìn)行分離，能使效應(yīng)成分的分離與篩選結(jié)合在一起，克服了以往先從中藥中分離有效部位或單體，再分析其藥效，從而使成分分離與效應(yīng)篩選脫節(jié)的弊端；對已知結(jié)構(gòu)的化合物進(jìn)行中藥效應(yīng)成分及作用靶點(diǎn)分析，加強(qiáng)中藥效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)、作用機(jī)理的研究。由于該技術(shù)能較快的提供中藥的效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)，并通過制備型HPLC制備相當(dāng)數(shù)量的純品，就有可能針對性地設(shè)計(jì)提取工藝，以盡可能多地富集效應(yīng)成分；了解了效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)，就有可能針對效應(yīng)物質(zhì)制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，也就可能針對效應(yīng)物質(zhì)的理化特征，研究其制劑形式，以保證藥品的安全、有效、可控、穩(wěn)定、均勻，實(shí)現(xiàn)中藥研究的現(xiàn)代化。

　　本研究首先采用紅細(xì)胞膜材料包被硅膠載體作為固定相，然后將此固定相裝柱，經(jīng)過最適條件考核后在線檢測當(dāng)歸水提液的乙酸乙酯部位、正丁醇部位和剩余水提液在紅細(xì)胞膜包被的硅膠載體固定相色譜柱上的色譜行為，發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸水提液的乙酸乙酯部位在此色譜柱上有多組分保留，采用HPLC/MS聯(lián)用技術(shù)鑒定被保留成分是分子量為190，192，194，206，224，226，242，278，380，382amu的10個(gè)化合物，是為紅細(xì)胞膜包裹硅膠生物柱色譜法。這一方法同時(shí)存在的缺點(diǎn)是難以既考慮紅細(xì)胞膜所需要的溫度、壓力、離子強(qiáng)度及溶液pH等要求，又顧及色譜分析所需要的壓力、流動(dòng)相及無機(jī)鹽離子等條件，難以達(dá)到既使生物材料選擇性結(jié)合中藥效應(yīng)成分又讓色譜分離效應(yīng)成分發(fā)揮最佳狀態(tài)。

　　為了解決紅細(xì)胞膜包裹硅膠生物柱色譜法的研究過程中存在的問題，第二階段研究以紅細(xì)胞直接與中藥提取液孵育后，洗去未結(jié)合的成分，接著用低pH緩沖液使紅細(xì)胞靶點(diǎn)失活，得到與靶點(diǎn)結(jié)合的效應(yīng)成分，再對得到的效應(yīng)成分進(jìn)行色譜分析。此法獲得初步成功；實(shí)驗(yàn)過程中也發(fā)現(xiàn)由于紅細(xì)胞釋放微量的細(xì)胞內(nèi)容物，有一定的干擾作用。

　　第三階段研究改用分離紅細(xì)胞膜作為生物固相材料，建立紅細(xì)胞膜固相色譜法。本方法主要工作分四步進(jìn)行，第一步先對擬分析藥材的指紋圖譜進(jìn)行研究，作為下一步紅細(xì)胞膜固相色譜研究的基礎(chǔ)。第二步是在模擬機(jī)體內(nèi)環(huán)境的條件下，首先讓紅細(xì)胞膜與藥材提取液中的有效成分進(jìn)行特異性結(jié)合，然后用緩沖溶液洗去未被紅細(xì)胞膜特異性結(jié)合的其它成分，紅細(xì)胞膜保留的成分即是與紅細(xì)胞膜靶點(diǎn)特異性結(jié)合的成分，這樣就得到了對紅細(xì)胞靶點(diǎn)有激活或抑制作用的成分。接著用低pH緩沖溶液將與靶點(diǎn)特異性結(jié)合的成分從紅細(xì)胞膜上洗脫下來，以HPLC進(jìn)行色譜分析，得到特征性的譜圖。第三步研究與紅細(xì)胞膜靶點(diǎn)特異性結(jié)合成分的色譜特征，與藥材提取液的指紋圖譜對照，確定特征峰在指紋圖譜中的位置，并以此特征圖譜作為指征，利用制備型高效液相色譜儀制備出純品，用HPLC-MS和NMR技術(shù)進(jìn)行分子量與結(jié)構(gòu)分析，最后確定與紅細(xì)胞膜靶點(diǎn)特異性結(jié)合的成分。第四步進(jìn)行藥理活性分析。