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將中藥的提取液經(jīng)濃縮(或不濃縮)后,較長(zhǎng)時(shí)間放置,就可析出沉淀,再經(jīng)重結(jié)晶可得單體成分,這是個(gè)別現(xiàn)象,如從槐米中提取蘆丁。如果要得到更多的成分,或者要系統(tǒng)地研究一味中藥中的化學(xué)成分,則需經(jīng)過(guò)比較復(fù)雜的過(guò)程,一般是經(jīng)過(guò)初步分離純化,得到某一類(lèi)型的總成分(混合物),或者得到極性相近的一混合物,再經(jīng)過(guò)進(jìn)一步分離得到單體成分。分離方法有很多種。
系統(tǒng)溶劑分離法
較常用的作法是將中藥乙醇或甲醇提取液適當(dāng)濃縮后,與某種擔(dān)體(如硅藻土、硅膠等)混合均勻,干燥后,用極性不同的溶劑,極性由小到大分別提取。
然后再選擇方法進(jìn)行分離。也可以將藥材粗粉直接用極性不同的溶劑分別提取,得各個(gè)部分。
兩相溶劑萃取法
萃取法是利用混合物中各成分在互不混溶的溶劑中分配系數(shù)不同而分離的方法??蓪⒈环蛛x物溶于水中,用與水不混溶的有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取,也可將被分離物溶在與水不混溶的有機(jī)溶劑中,用適當(dāng)pH的水液進(jìn)行萃取,達(dá)到分離的目的。
簡(jiǎn)單萃取法
在中藥成分的系統(tǒng)研究中,常采用的方法是將中藥水提取液適當(dāng)濃縮,或?qū)⒅兴幰掖?(甲醇)提取液適當(dāng)濃縮,回收醇后,加入適量水,用極性不同的與水不混溶的有機(jī)溶劑,極性由小到大,如選用石油醚(或己烷)、氯仿(或乙醚)、醋酸乙酯、正丁醇,分別進(jìn)行萃取,分別回收溶劑得到極性不同的萃取物。在某些情況下也可只選1~2種溶劑進(jìn)行萃取。
分離堿性成分(生物堿)或酸性成分,可調(diào)節(jié)溶液的pH值后再進(jìn)行萃取是常用的方法。
pH梯度萃取法
此法是分離生物堿類(lèi)成分、酸性及酚性成分的一種方法。是利用被分離成分的堿性或酸性不同而采用的方法。
連續(xù)萃取法
為克服使用分液漏斗多次萃取的操作麻煩,可采用連續(xù)萃取器。這一儀器利用兩溶劑的比重不同,自然分層和分散相液滴穿過(guò)連續(xù)相溶劑時(shí)發(fā)生傳質(zhì)。選擇連續(xù)萃取法時(shí),需視所用溶劑的比重大于或小于被提取的水溶液比重的情況,而采用不同式樣的儀器。
液滴逆流分配法
此法需特殊的儀器,多用于極性較大的成分的分離,關(guān)鍵是選擇好固定相和流動(dòng)相。
沉淀法
此法是將被分離物溶于某種溶劑中,再加入另外一種溶劑或試劑,使某種或某些成分析出沉淀,而某些成分保留在溶液中經(jīng)過(guò)濾后達(dá)到分離的一種方法??梢允闺s質(zhì)沉淀析出,也可使欲得成分沉淀析出。
制藥中較常用的方法是中藥的水提取液濃縮到一定程度后,加入濃乙醇使含醇量達(dá)到一定濃度,使一些成分析出沉淀,通常為50~80%,具體含醇量視欲得到的成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)而定。此法通常稱為“水煮醇沉法”。用此法可除去或得到多糖類(lèi)等成分。
鉛鹽法曾被應(yīng)用于分離具有酸性和中性的成分,目前已較少用。[具體操作法]
在中性醋酸鉛沉淀部分可得到含羧基及鄰二酚羥基的成分,如有機(jī)酸、粘液質(zhì)、鞣質(zhì)、某些黃酮等。堿式醋酸鉛沉淀部分得到只有一個(gè)酚羥基的成分以及中性皂苷等。經(jīng)堿或醋酸鉛沉淀后的水或醇液中有中性成分。因鉛對(duì)人有害,生產(chǎn)中最好不用此法。
根據(jù)被分離成分結(jié)構(gòu)選用某些特殊試劑使某些成分沉淀,經(jīng)分解沉淀得欲得的成分,如水溶性生物堿的分離常用雷氏鹽沉淀法。
鹽析法
鹽析法是在中藥水提液中,加入無(wú)機(jī)鹽至一定濃度,或達(dá)飽和狀態(tài),可使某些成分在水中溶解度降低,從而與水溶性大的雜質(zhì)分離。常作鹽析的無(wú)機(jī)鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。例如自黃藤中提取掌葉防己堿,自三顆針中提取小檗堿在生產(chǎn)上都是用氯化鈉或硫酸銨鹽析制備。有些成分如原白頭翁素、麻黃堿、苦參堿等水溶性較大,在提取時(shí),亦往往先在水提取液中加入一定量的食鹽,再用有機(jī)溶劑提取。
分餾法
對(duì)于完全能夠互溶的液體系統(tǒng),可利用各成分沸點(diǎn)的不同而采用分餾法,中藥化學(xué)成分的研究工作中,揮發(fā)油及一些液體生物堿的分離即常用分餾法。例如毒芹總堿中的毒芹堿和羥基毒芹堿,前者沸點(diǎn)為166~167℃,后者為226℃,彼此相差較遠(yuǎn),即可利用其沸點(diǎn)的不同通過(guò)分餾法分離。
一般說(shuō)來(lái),液體混合物沸點(diǎn)相差在100℃以上,可將溶液重復(fù)蒸餾多次即可達(dá)到分離的目的,如沸點(diǎn)相差在25℃以下,則需采用分餾柱,沸點(diǎn)相差越小,則需要的分餾裝置越精細(xì)。
結(jié)晶法
結(jié)晶法是分離和精制固體成分的重要方法之一,是利用混合物中各成分在溶劑中的溶解度不同來(lái)達(dá)到分離的方法。
結(jié)晶法所用的樣品必須是已經(jīng)用其他方法提得比較純的時(shí)候,才能采用此法精制,如果中藥的粗提取部分的純度很差,則很難得到結(jié)晶,因結(jié)晶乃同類(lèi)分子自相排列,如果雜質(zhì)過(guò)多,則阻礙分子的排列。
有些中藥成分的結(jié)晶若含有兩種以上的成分時(shí),就可用分步結(jié)晶法使之分離。
結(jié)晶的純度可由化合物的晶形、色澤、熔點(diǎn)和熔距、薄層色譜或紙色譜等作初步鑒定。一個(gè)單體純化合物一般都有一定的熔點(diǎn)和較小的熔距,同時(shí)在薄層色譜或紙色譜中經(jīng)數(shù)種不同展開(kāi)劑系統(tǒng)檢定,也為一個(gè)斑點(diǎn)者,一般可以認(rèn)為是一個(gè)單體化合物。
色譜法
定義 色譜法又稱色層法或?qū)游龇ǎ欠蛛x和鑒定化合物的有效方法。
應(yīng)用
(1)分離混合物 在中藥提取物的有效部位中,往往含有結(jié)構(gòu)相似、理化性質(zhì)相似的幾種成分的混合物,用一般的化學(xué)方法很難分離,可用色譜法將它們分開(kāi)。
(2)精制化合物 在提取、分離得到有效成分時(shí),往往含有少量結(jié)構(gòu)類(lèi)似的雜質(zhì),不易除去,也可利用色譜法除去雜質(zhì)得到純品。
(3)鑒定化合物 在一定條件下,純粹的化合物在薄層色譜或紙色譜中都有一定的Rf值,在氣相色譜和高效液相色譜中有一定的保留時(shí)間,所以利用色譜法可以鑒定化合物的純度或利用標(biāo)準(zhǔn)品的對(duì)照來(lái)初步確定兩種性質(zhì)相似的化合物是否為同一物質(zhì)。
色譜條件的選擇
由于中藥有效成分類(lèi)型不同,性質(zhì)各異,所以選擇色譜條件是不同的。
一般生物堿的分離可用硅膠或氧化鋁柱色譜,對(duì)于極性較高的生物堿可用分配色譜,而對(duì)季銨型水溶性生物堿也可用分配色譜或離子交換色譜。
苷類(lèi)的色譜分離往往決定于苷元的性質(zhì),如皂苷、強(qiáng)心苷,一般可用分配色譜或硅膠吸附色譜。
揮發(fā)油、甾體、萜類(lèi)包括萜類(lèi)內(nèi)酯,往往首選氧化鋁及硅膠色譜。
黃酮類(lèi)化合物、鞣質(zhì)等多元酚衍生物可用聚酰胺吸附色譜。
有機(jī)酸、氨基酸一般可選用離子交換色譜,有時(shí)也用分配色譜。有些氨基酸也可用活性炭吸附色譜。
對(duì)于大分子化合物,如多肽、蛋白質(zhì)、多糖,常用凝膠色譜。
總的來(lái)說(shuō),對(duì)非極性成分往往考慮用氧化鋁或硅膠吸附色譜;若極性較大則采用分配色譜或弱吸附劑吸附色譜;對(duì)酸性、堿性、兩性成分可采用離子交換色譜,有時(shí)也可用吸附色譜及分配色譜等。
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