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色譜法是目前分離三萜類化合物zui常用的方法，通常采用多種色譜法相組合的方法：

①吸附柱色譜法；②分配柱色譜法；③高效液相色譜法；④大孔樹脂柱色譜；⑤凝膠色譜法。

（1）吸附柱色譜法：

①常用方法，可用于分離各類三萜化合物。

②依據(jù)所用的吸附劑性質的不同，分為正相吸附柱色譜和反相吸附柱色譜。

③正相吸附柱色譜的吸附劑常用硅膠。

④反相柱色譜通常以鍵合相硅膠Rp-18、Rp-8或Rp-2等為填充劑。

（2）分配柱色譜法：多用于分離皂苷，常用硅膠等作為支持劑，固定相為3%草酸水溶液等，流動相為含水的混合有機溶劑：如氯仿-甲醇-水，正丁醇-水等。

（3）高效液相色譜法：是目前分離皂苷類化合物最常用的方法，分離效能較高。用于皂苷的分離制備一般采用反相色譜柱，以甲醇-水、乙腈-水等系統(tǒng)為洗脫劑。

（4）大孔樹脂柱色譜：適用于皂苷的精制和初步分離。

操作：將含有皂苷的水溶液通過大孔樹脂柱后，先用水洗滌除去糖和其他水溶性雜質，然后再用濃度由低到高的甲醇或乙醇依次進行梯度洗脫，極性大的皂苷可被l0%——30%的醇洗脫下來，極性小的皂苷則被50%以上的醇洗脫下來。

（5）凝膠色譜法：分子篩的原理來分離分子量不同的化合物，在用不同濃度的甲醇、乙醇或水等溶劑洗脫時，各成分按分子量遞減順序依次被洗脫下來。即分子量大的皂苷先被洗脫下來，分子量小的皂苷后被洗脫下來。應用較多的是在有機相中使用的SephadexLH-20。

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