免疫球蛋白的分離提純

Δ 目的

有利標記；減少非特異反應；有利Ig定量

Δ 分離提純方法（原理）：一般選用2~3種，或同一方法反復進行2~3次

鹽析法：在不同濃度的中性鹽中蛋白質會脫水，降低帶電電勢，親水性變?yōu)槭杷?，分子間相互凝聚而沉淀（鹽析作用）。不同蛋白質鹽析所需中性鹽的濃度不同，故可分離不同蛋白質。常用中性鹽：硫酸銨分析純試劑

離子交換層析法：利用不同的蛋白質在緩沖溶液中所帶電荷不同，與某一載體上的具有相反電荷的離子基團進行吸附，然后進行解脫，達到純化蛋白質目的。常用載體：纖維素DEAE，帶正電，吸附帶負電的Alb、α、β球蛋白

凝膠過濾法：凝膠顆粒是網狀結構，當分子大小不同的混合物通過凝膠柱時，分子大的先下來，分子小的嵌入凝膠顆粒的網狀結構中后下來，從而將分子大小不同的物質分離開來，即為分子篩的作用。常用凝膠：葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、瓊脂糖凝膠，分離Ig多用G150

親和層析法：利用抗原抗體的結合具有特異性、可逆性，將純化抗原先交聯到載體（瓊脂糖珠）上，制成親和層析柱，當Ab（Ig）通過時，與抗原特異性結合在柱上，Ab中雜質流出。然后通過改變緩沖液 pH、離子強度，使Ab解脫下來。