毒理學是一門研究化學物質(zhì)對生物體的毒性反應、嚴重程度、發(fā)生頻率和毒性作用機制的科學，也是對毒性作用進行定性和定量評價的科學。毒理學與藥理學密切相關，目前已發(fā)展成為具有一定基礎理論和實驗手段的獨立學科，并逐漸形成了一些新的毒理學分支。本文就新技術在分子毒理學中的應用及毒理學的一些發(fā)展趨勢作一簡述。

　　　　1　基因引入技術在毒理學中的應用

　　　　分子毒理學研究是采用分子生物學技術和方法來研究毒理學問題。如體外采用細胞培養(yǎng)等檢測基因毒性，整體動物試驗采用轉(zhuǎn)基因動物模型，這對于闡明外源性化學物的毒性及其機制均有重要意義。

　　　　基因引入技術是把一段DNA（可以是一個完整的基因，也可以是一個基因片段）引入到細胞或生物體內(nèi)。引入的DNA可以改變毒物的作用強度，或改變毒物作用方式。因此，可以通過毒物作用程度或方式的改變來判斷引入的DNA所起的毒性作用。

　　　　1.1　在致突變檢測中的應用

　　　　基因毒物是指能損害遺傳物質(zhì)DNA的化學物，大多為致突變劑。常規(guī)的Ame′s試驗是由細菌介導的檢測基因毒物的方法。但這種方法也有一定的局限性，有時可出現(xiàn)假陽性結(jié)果。如谷胱甘肽和半胱氨酸均為抗癌劑，但在Ame′s試驗中卻顯示較強的致突變能力。此外，細菌和動物細胞在其生物學方面有很大差異，因此體外動物細胞實驗較細菌更能反映毒物在機體內(nèi)的作用。有兩類細胞常用于基因毒物的檢測，一類為原代細胞，另一類為傳代細胞。有多種指標用于檢測化學物的基因毒性，如核苷酸同位素標記法，若一種化學物能損害DNA，細胞在用該化學物處理后，對損害的DNA要進行修復，修復過程需要核苷酸，如果在培養(yǎng)基中加入同位素標記的核苷酸，則修復的DNA即被同位素標記，在一定情況下，損害的DNA越多，修復的就越多，細胞DNA含的同位素就越多。因此，通過檢測DNA中同位素的含量來決定該化學物的基因毒性。另一種判斷方法是根據(jù)基因毒物能改變細胞的代謝。如正常的V79細胞具有次黃嘌呤磷酸轉(zhuǎn)移酶，這種酶是正常替代途徑中合成嘌呤核苷酸的必需酶。如果培養(yǎng)基中有嘌呤的同系物（如8-偶氮鳥嘌呤），這種酶能將其同系物轉(zhuǎn)化成相應的嘌呤核苷酸而合成DNA，但嘌呤同系物沒有正常嘌呤功能，因此會導致細胞死亡。相反，如果一種化學物能損害DNA而使次黃嘌呤磷酸轉(zhuǎn)移酶的基因發(fā)生損害而不能合成正常的酶，其受損的細胞反而存活下來。存活的細胞越多，在一定情況下說明該化學物的致突變能力越強。

　　　　某些化學物本身并沒有毒性，但其代謝物顯示出較強的毒性作用。對于這些化學物，上述方法不能檢測出它們的毒性。為了克服這一缺點，可在細胞或細菌培養(yǎng)液中加入肝細胞抽提液以幫助代謝毒物。有的實驗室還用少量原代細胞與被檢的傳代細胞混合培養(yǎng)，由引入的原代細胞提供代謝酶。如硝基二甲基胺，用常規(guī)的細菌檢測系統(tǒng)顯示不出任何突變作用，但在細菌培養(yǎng)液中加入肝細胞抽提液后，顯示出很強的基因毒性。這些實驗也存在許多問題，如有些代謝物的半衰期很短，來不及進入檢測細胞與其DNA作用就失活了，肝臟抽提液或原代細胞代謝酶活性隨時間下降得很快；肝臟抽提液或原代細胞含多種酶，即使能代謝毒物并顯示出毒性，也不知道是哪種酶起主導作用。很顯然，建立一種細胞株，能合成某種單一的酶，對研究毒物的毒性作用很重要。利用分子生物學技術，把轉(zhuǎn)錄某種代謝酶的DNA連接，再接到基因載體上（多為質(zhì)?；虿《荆?，這段具有調(diào)控能力的DNA，能與體外培養(yǎng)細胞的轉(zhuǎn)錄因子作用，把含有編碼某種代謝酶的DNA的基因載體引入到體外培養(yǎng)細胞，該細胞就能表達這種特異的酶。這方面較突出的例子是細胞多功能性單胺氧化酶（P450）。體外建立能表達P450的細胞株有兩類，一類是能長期穩(wěn)定表達的細胞株，一類是能短期表達的細胞株。人的多種P450，如1A1，2A6，2E1，3A4等，已成功地引入人的淋巴樣細胞株、鼠的胎盤細胞株、蒼鼠肝癌細胞株等，這些細胞株由于能表達毒物代謝酶，對需要代謝后才有毒性的化學物，其檢測敏感度提高許多倍。如表達2A6的細胞比不表達2A6的同樣細胞株，在檢測硝基二甲基胺的毒性方面要敏感500倍；比表達2E1的細胞也要敏感大約500倍。說明硝基二甲基胺要代謝以后才能顯示毒性，也說明2A6是能將硝基二甲基胺轉(zhuǎn)化為毒性代謝物的代謝酶，而2E1則不是。

　　　　1.2　轉(zhuǎn)基因動物在毒理學中的應用

　　　　轉(zhuǎn)基因動物是在其基因組中含有外來遺傳物質(zhì)的動物，它被廣泛應用于科學研究的各個方面。由于轉(zhuǎn)基因動物集整體、細胞和分子水平于一體，更能體現(xiàn)生命整體研究的效果，因此成為毒理學研究的熱點之一。

　　　　1.2.1　一般毒性研究模型

　　　　C-fos-LacZ轉(zhuǎn)基因小鼠用于神經(jīng)毒性的研究。金屬硫蛋白（MT）基因的轉(zhuǎn)基因和基因刪除小鼠用于金屬和某些非金屬的研究。如用MT轉(zhuǎn)基因小鼠對鎘等的抗性增加，而MT的基因刪除小鼠對鎘、銀、汞、順鉑和四氯化碳的毒性敏感性增強。

　　　　1.2.2　致突變檢測模型

　　　　轉(zhuǎn)基因動物為解決遺傳毒性研究中長期存在的一些問題提供了可能性。如體外試驗和體內(nèi)整體動物的定性、定量外推，整體動物基因突變需消耗大量動物和時間，如確定靶器官以及對誘發(fā)的遺傳改變做精細分析等。自Gosen等1989年建立了第一個轉(zhuǎn)基因突變檢測模型以來，已有十多種模型。

　　　　1.2.3　致癌檢測模型及其在致癌物質(zhì)作用機制研究中的應用

　　　　轉(zhuǎn)基因動物為快速檢測致癌物、促癌物和研究化學致癌的機制提供了新的重要途徑。目前已建立的檢測模型或研究模型有：①過量表達癌基因的轉(zhuǎn)基因動物模型　如TG，AC小鼠，HK-fos轉(zhuǎn)基因小鼠，ras-H2轉(zhuǎn)基因小鼠，攜帶激活的H-ras原癌基因小鼠等。這些轉(zhuǎn)基因動物對化學致癌劑的敏感性提高了許多倍。如帶有激活Pim-l腫瘤基因的轉(zhuǎn)基因動物，對乙基硝基脲的致癌作用，較相應的非轉(zhuǎn)基因動物，其敏感性提高了25倍；②基因刪除動物致癌檢測模型　用同源重組的方法，將一段DNA整合到抗腫瘤基因，使該抗腫瘤基因不能表達具有正常功能的蛋白質(zhì)，用這種方法培養(yǎng)的動物稱基因刪除動物。在這方面研究得最多的是腫瘤抑制基因P53.基因刪除動物P53（+/-）和正常動物P53（+/+）一樣，發(fā)育和生長均無異常，但用致癌劑（如二硝基二甲胺）處理后，P53（+/-）基因刪除動物的平均壽命為29周，而P53（+/+）的平均壽命為42周，其腫瘤的發(fā)生與分布也有很大的差異。其他如芳香烴受體（AHR）小鼠、過氧化物酶體增殖劑誘導的受體α（PPARα）小鼠等；③轉(zhuǎn)基因動物用于生殖毒性研究　ZP3（編碼）透明帶硫酸糖蛋白基因刪除小鼠、雌激素受體基因或孕酮受體基因刪除小鼠、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶基因刪除小鼠等。

　　　　1.2.4　用于特定組織毒性研究的轉(zhuǎn)基因動物

　　　　典型的例子是用含乳糖操縱子的噬菌體培育一種轉(zhuǎn)基因動物，具有乳糖操縱子的噬菌體在感染某些細菌后，菌落為藍色。如果含有乳糖操縱子的噬菌體在體內(nèi)由于受化學物的處理而受到損害， 不能抄錄正常的半乳糖苷水解酶，這種噬菌體在體外裝配后，其感染細菌的菌落為無色。因此根據(jù)藍色和無色菌落的多少，來判斷某些化學物基因毒性的強弱。此外，用質(zhì)粒作為載體也獲成功，從而提高了檢測的敏感性，更重要的是，化學物處理后的動物，基因載體可以從不同組織細胞分離出來，因此這種動物能顯示化學物的組織細胞特異毒理學作用。

　　　　2　毒理學預測范疇的新進展

　　　　毒理學和流行病學，特別是與分子流行病學相結(jié)合應用于危險度的評價。經(jīng)典方法中對安全系數(shù)作了許多附加修正，以提高種屬之內(nèi)與之間推導預測的精確性，但其后果使毒理學家面臨來自各種行政規(guī)定而缺乏科學依據(jù)的一連串修正系數(shù)。近年來已提出了新的方法，以盡可能使實際數(shù)據(jù)而不是人為的假設來確定安全系數(shù)。如對致癌物質(zhì)的評定將使用一種定量的模型，它所重視的是從高劑量到低劑量的推導，而不是從動物到人的種屬間的推導。目前最常見的是線性多級LMS模型，它是將最大耐受量（MTD）的可信限上端延伸到原點，利用該直線的低劑量區(qū)域來估計外源性化學物的量效關系曲線或其毒性強度。這種模型使用一個對應于小生物學單位：即分子的劑量值，而不是將零作為劑量軸的原點。

　　　　外源性化學物安全性評價的策略新進展還包括用毒性等效性因子或問答式的方法，構(gòu)效關系的定量分析，以及藥效和藥代動力學模型來研究復雜化學物。

　　　　3　21世紀毒理學的發(fā)展趨勢

　　　　3.1　傳統(tǒng)和現(xiàn)代毒理學研究方法相結(jié)合將推動毒理學的發(fā)展過程

　　　　過去毒理學研究主要以整體動物試驗和人體觀察相結(jié)合，在相當一段時期內(nèi)這仍然是重要和必要的手段。隨著分子生物學的理論和方法應用于毒理學的研究，將使外源性化學物的毒性評價發(fā)展到體外細胞、分子水平的毒性測試與人體志愿者試驗相結(jié)合的新模式，而傳統(tǒng)以動物為基礎的毒理學研究將減少。某些復雜的整體實驗將逐步為體外試驗或構(gòu)效關系數(shù)學模式所代替。目前用于有害因素的毒性試驗系統(tǒng)將被基因工程的動物和細胞所代替；傳統(tǒng)的發(fā)病率和死亡率終點將被生化指標所替代；現(xiàn)在需要數(shù)月給藥和評價的毒性研究將在幾小時內(nèi)完成。轉(zhuǎn)基因動物對外源性化學物的毒性反應將與人體極為一致，例如取分裂中的人組織培養(yǎng)細胞到體外減數(shù)分裂，現(xiàn)行毒性試驗的解釋和外推方式將改變。

　　　　3.2　大量新技術和新方法的應用將使毒理學研究水平更加深入

　　　　上面提到的一些體外細胞檢測和轉(zhuǎn)基因動物或基因刪除動物模型應用于毒理學研究外，其他新技術如系列分析法、DNA芯片或DNA微點陣等可同時測定數(shù)千個基因的表達，用于觀察基因的上調(diào)和下調(diào)；基因誘捕、代表性差異分析等將為研究化學物致畸的分子機制提供可能；應用基因分布圖能區(qū)別特異性或非特異性的細胞損傷；應用絡合物形成作用介導的PCR研究DNA損傷和核苷酸水平上的修復；生物標記物在毒理學中的應用顯得越來越重要，如特異的DNA和蛋白質(zhì)加合物用于有效暴露的生物標記，用NMR分析尿中的代謝產(chǎn)物，可以確定作為毒性反應生物標記物的代謝變化模式。又如外周血（血小板、白細胞、紅細胞）中的生化標記物可用于測定外源性化學物對神經(jīng)系統(tǒng)損傷的替代標志物。

　　　　在毒理學的研究中，重要的問題是如何把從動物所獲得的資料用于人，把體外資料用于體內(nèi)，把復雜的整體系統(tǒng)化為簡單的并能人為控制的系統(tǒng)，以及如何提高檢測的敏感性等。轉(zhuǎn)基因技術為解決這些問題提供了嶄新的手段。在代謝途徑上，通過基因轉(zhuǎn)移能人為控制某一化學物的代謝；在整體水平上，可以人為控制某一基因的表達水平，從而闡明該基因在化學物致毒過程中的作用?？梢灶A言，各種不同的轉(zhuǎn)基因動物或基因刪除動物的建立，將對闡明化學物的毒性作用機制，起到重大的作用。

　　　　3.3　采用多種方法結(jié)合起來評價化學物的毒性將是一個重要趨勢

　　　　過去20多年應用常規(guī)的毒理學方法研究外源性化學物，對于大多數(shù)化學物是否獲得足夠的毒理學信息值得懷疑?？紤]到化學物質(zhì)的暴露對人類健康的影響，這一問題就顯得更為突出。由于毒理學試驗要消耗大量動物，因此在毒理學研究中盡量減少動物用量是每一個負責任的毒理學家應該考慮的問題。顯然，如果想對如此眾多的外源性化學物有一個合理的改變，就應該建立新的、可供選擇的、耗費動物少、試驗周期較短、花費較少的毒理學研究方法。這些方法應該根據(jù)以下標準來衡量：①動物用量減少；②試驗周期縮短；③研究化學物在環(huán)境中的實際濃度；④利用統(tǒng)計或數(shù)學模型；⑤預先進行有效的實驗設計；⑥發(fā)展管理毒理學等。例如，制藥工業(yè)將采用嚙齒類動物（主要是大鼠）的微核試驗與2～4周的毒代動力學研究結(jié)合起來的方法來評價藥物。

　　　　3.4　毒理學分支學科形成發(fā)展迅速，“二極”分化現(xiàn)象更為突出

　　　　近30年來毒理學由于發(fā)展迅速及與相關學科的交叉而形成了許多分支。如根據(jù)工作任務可分為臨床毒理學、環(huán)境毒理學、工業(yè)毒理學、管理毒理學、生態(tài)毒理學與法醫(yī)毒理學等；根據(jù)研究手段與終點不同可分為免疫毒理學、分子毒理學、膜毒理學、遣傳毒理學、分析毒理學等；根據(jù)研究對象可分為昆蟲毒理學、獸醫(yī)毒理學、人體毒理學與植物毒理學；根據(jù)不同外源性化學物可分為金屬毒理學、農(nóng)藥毒理學、食品毒理學、放射毒理學、藥物毒理學與燃燒毒理學；根據(jù)研究工作性質(zhì)可分為描述毒理學（指常規(guī)毒性試驗和安全評價）、機理毒理學和管理毒理學等。近年來還出現(xiàn)更多的毒理學分支，如比較毒理學、地理毒理學、急癥毒理學等?？梢灶A見，下世紀還將出現(xiàn)一些新的分支。

　　　　此外，毒理學分化將更為明顯。一方面毒理學的軟件部分——管理毒理學仍將是毒理學的研究熱點之一，這將從宏觀上為化學毒物的管理提供科學依據(jù)；另一方面，研究水平越來越精細，從細胞、分子和基因水平研究毒理學問題將是普通的科學工作。上述二方面既分化，又相互滲透和結(jié)合，使毒理學的軟、硬件結(jié)合更為突出。

　　　　總之，毒理學與人類日常生活和生產(chǎn)勞動關系日益密切，如環(huán)境污染、生態(tài)環(huán)境的惡化、藥物的不良反應、食品的安全性、獸藥及農(nóng)藥的危害，以及作業(yè)環(huán)境的有毒物質(zhì)是世界范圍內(nèi)的嚴重問題?？梢灶A見，在21世紀毒理學將會獲得更大的發(fā)展，為人類作出更大的貢獻。雖然近年來細胞、分子水平的研究取得了很大的進展，但僅從基因分子水平研究外源性化學物的毒性及其機制是不夠的，因為機體還有宏觀的一面，必須把微觀研究與宏觀研究緊密結(jié)合起來，也就是將整體試驗與體外細胞、分子水平的研究結(jié)合起來才能得出正確結(jié)果。