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基因工程基本原理-口腔醫(yī)師輔導

2013-07-25 19:07 醫(yī)學教育網(wǎng)
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  基因工程基本原理:一個完整的基因克隆過程應包括:目的基因的獲取,克隆基因載體的選擇與改造,目的基因與載體的連接,重組DNA分子導入受體細胞,篩選出含感興趣基因的重組DNA轉化細胞.醫(yī)學|教育|網(wǎng)整理。實現(xiàn)上述過程需要一些重要的工具酶,如限制性內(nèi)切核酸酶連接酶等。限制性內(nèi)切核酸酶是一類識別DNA特意序列的內(nèi)切核酸酶。

  一、目的基因的獲?。?/strong>

  外源基因又稱目的基因,來源于幾種途徑:化學合成、酶促合成cDNA,制備的基因組DNA及PCR技術。細菌質粒、噬菌體和一些病毒DNA均可被改造成基因克隆的載體。

  二、基因載體的選擇與構建:

  可作為基因載體的DNA分子有質粒DNA、噬菌體DNA和病毒DNA,它們經(jīng)適當改造后仍具有自我復制能力,或兼有表達外源基因的能力。

  三、外源基因與載體的連接:

  連接方式有:黏性末端連接、平端連接和人工接頭連接等。

  四、重組DNA導入宿主細胞:

  外源DNA與載體在體外連接成重組DNA分子,需將其導入宿主細胞。隨受體細胞生長、增殖,重組DNA分子得以復制、擴增。

  五、重組體的篩選:

  鑒定哪一菌落或嗜菌斑所含重組DNA分子確實帶有目的基因,即可得到目的基因的克隆,這一過程即為篩選或選擇。

  六、克隆基因的表達:

  在原核或真核表達體系中進行表達,獲得所需要的蛋白質。

  例題(單選):在分子生物學領域中,分子克隆主要是指:

  A.DNA的大量復制

  B.DNA的大量剪切

  C.RNA的大量復制

  D.RNA的大量剪切

  E.反轉錄酶

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