乳酸左氧氟沙星是我國(guó)新研制的第三代喹諾酮類抗菌藥，為氧氟沙星的旋光異構(gòu)體，具有抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn). 其抗菌活性是光學(xué)對(duì)映體D型的8128倍，外消旋體OFLX的2倍. 參照文獻(xiàn)［1-3］，我們建立了用反相高效液相色譜法測(cè)定乳酸左氧氟沙星血藥濃度的方法，對(duì)18名健康志愿者自身交叉口服兩種乳酸左氧氟沙星片后的藥代動(dòng)力學(xué)和生物利用度進(jìn)行了分析和比較.

材料和方法

1.1材料參比制劑: 乳酸左氧氟沙星片(來(lái)立信片，浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠生產(chǎn)，規(guī)格 0.1 g/粒，批號(hào) 040478)；受試制劑:乳酸左氧氟沙星片(天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司提供，規(guī)格 0.1 g/粒，批號(hào) 030928)；乳酸左氧氟沙星對(duì)照品:中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)130455200202. 甲醇(G.R. 北京化工廠，批號(hào) 20020629)，四丁基溴化氨：分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心，批號(hào) 20040531，二氯甲烷(AR.北京化工廠，批號(hào) 20030319).

島津LC10A高效液相色譜儀，包括LC10A高壓輸液泵、LC10AV紫外可調(diào)檢測(cè)器、CTO10A柱溫箱、7125手動(dòng)進(jìn)樣閥、分析之星色譜工作站.

1.2方法

1.2.1分組和血樣采集18名健康志愿者(為醫(yī)學(xué)院校在校學(xué)生)，男性，年齡21～24歲，體質(zhì)量51～70 kg，無(wú)煙酒嗜好. 受試前經(jīng)體格檢查及心電圖、肝、腎功能檢查正常. 給藥前2 wk至整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程結(jié)束未服任何其他藥物，試驗(yàn)期間禁忌煙酒及含咖啡飲料，禁做劇烈活動(dòng)，用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)餐. 18名健康志愿者隨機(jī)分成兩組，禁食12 h，于早晨服藥前采空白血,7:00開(kāi)始陸續(xù)服用參比制劑或供試制劑，劑量均為0.2 g， 250 mL溫開(kāi)水送服，3 h后可以飲水，4 h后用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)低脂餐. 于服藥后0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2, 4, 6, 9, 12和24 h，各采集靜脈血4 mL，血樣置標(biāo)號(hào)塑料試管中，室溫放置2 h，3000 r/min離心20 min，分取血清，置-30℃冰箱保存，測(cè)定前自然解凍. 間隔1 wk，自身交叉服用另一制劑.

1.2.2樣品處理與測(cè)定取血清0.5 mL，加入0.5 mol/L HCl溶液200 μL混勻,加乙醚5 mL旋渦混勻器萃取2 min， 3000 r/min離心10 min，取上清液3.5 mL于另一尖底試管中，40℃水浴中氮?dú)獯蹈桑?00 μL流動(dòng)相復(fù)溶，進(jìn)樣30 μL，按前述色譜條件測(cè)定乳酸左氧氟沙星的峰面積，以外標(biāo)法進(jìn)行定量.

1.2.3方法學(xué)考察與評(píng)價(jià)

1.2.3.1色譜條件色譜柱:Scienhome C18 ODS (ID 4.6 mm × 200 mm,填料粒度5 μm,德國(guó) Kromasil)，流動(dòng)相:0.01 mol/L磷酸二氫鉀甲醇 0.5 mol/L四丁基溴化氨(78:22： 4, V/V/V),流速: 1 mL/min ，柱溫:40℃，檢測(cè)波長(zhǎng):294 nm.

1.2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取健康人混合血清0.5 mL 分別加入乳酸左氧氟沙星系列標(biāo)準(zhǔn)液，配成0.025, 0.125, 0.25, 0.5, 1.5, 3.0 mg/L的血清樣品，混勻，以下操作同樣品處理與測(cè)定項(xiàng)，以峰面積X對(duì)濃度C作線性回歸，得方程: C=0.002645X +2.782784 (r=0.9997)，乳酸左氧氟沙星在0.025～3.0 mg/L范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好. 最低檢出濃度為0.01 mg/L.

1.2.3.3精密度和回收率用不同濃度的乳酸左氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)液加健康人混合血清配成0.125, 0.5和3.0 mg/L的血清樣品，每個(gè)濃度各5份，按樣品制備項(xiàng)下處理測(cè)定（表1)，提示回收率符合要求. 用不同濃度乳酸左氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)液加健康人混合血清配成0.05, 0.5和1.5 mg/L的血清樣品，按樣品制備項(xiàng)下，于1 d內(nèi)處理測(cè)定 5次，另按上述操作，每日處理測(cè)定1次，連續(xù)5 d，得日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(表2),提示方法精密度符合要求.表1血清中乳酸左氧氟沙星的回收率表2方法精密度

1.2.3.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析志愿者的血藥濃度時(shí)間數(shù)據(jù)，用“生物利用度和等效性統(tǒng)計(jì)軟件”求算有關(guān)藥動(dòng)學(xué)參數(shù). AUC按梯形面積法計(jì)算，時(shí)間范圍取0～24 h. 相對(duì)生物利用度分別由受試制劑與參比制劑的AUC(0-t)和AUC(0-∞)相比而得. 計(jì)算公式為：F1=［ AUC(0-t) (受試制劑)/AUC(0-t) (參比制劑)］× 100%；F2=［AUC(0-∞)(受試制劑)/AUC(0-∞)(參比制劑)］× 100%.

結(jié)果

藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)兩種片劑的有關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)及生物等效性見(jiàn)表3，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，兩者之間的差異無(wú)顯著性意義（P>0.05）. 本研究過(guò)程中無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)事件發(fā)生，也未發(fā)現(xiàn)與藥物有關(guān)的不良反應(yīng)事件.表3乳酸左氧氟沙星的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及相對(duì)生物利用度

討論

本實(shí)驗(yàn)使用反相高效液相法測(cè)定血清中的乳酸左氧氟沙星濃度，其流動(dòng)相的配制及血樣的提取方法均較為簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)，回收率較高，峰形尖銳，血清中雜質(zhì)峰對(duì)藥物峰無(wú)干擾.

本實(shí)驗(yàn)所有數(shù)據(jù)經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換和不轉(zhuǎn)換后使用雙單側(cè)檢驗(yàn)法，檢驗(yàn)對(duì)照藥品和受試藥品的等效性和置信區(qū)間，檢驗(yàn)所得結(jié)果一致. 相對(duì)生物利用度為F1=0.9998，F(xiàn)2=0.9917兩種片劑的兩組參數(shù)中Cmax, tmax, AUC(024 h), AUCinf均經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析和雙單側(cè)t檢驗(yàn),其差異無(wú)顯著性,即兩種制劑生物等效.