1.1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物剛斷乳的SD大鼠,體重60~70g,清潔級(jí),雌雄各半,動(dòng)物及普通飼料均由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
1.2、實(shí)驗(yàn)藥物防風(fēng)通圣丸[江蘇平光信誼(焦作)有限公司生產(chǎn),批號(hào):070202,規(guī)格:5g/袋],蘆薈減肥茶(廣州權(quán)威保健品有限公司生產(chǎn),批號(hào):20061108,規(guī)格:6g/袋),使用前配置成5%溶液。
1.3、主要儀器電子天平(型號(hào):BS600,上海友聲衡器有限公司制造),自動(dòng)平衡離心機(jī)(型號(hào):LD24-0.8,北京醫(yī)用離心機(jī)廠制造),全自動(dòng)生化分析儀(型號(hào):7060,日本制造)。
1.4、主要試劑甘油三酯(批號(hào):070181),膽固醇(批號(hào):0700271),血糖(批號(hào):070456),以上試劑均購(gòu)自北京中生北控生物科技股份有限公司。方法:葡萄糖氧化酶法。
1.5、大鼠營(yíng)養(yǎng)性肥胖模型的制備及給藥方法取SD大鼠80只,隨機(jī)兩組,正常對(duì)照組(n=12),飼喂普通飼料;其余大鼠為肥胖模型組,飼喂高脂飼料[3~5]。高脂飼料的組成:普通飼料55%,豬油12%,蔗糖5%,奶粉8%,花生5%,雞蛋10%,麻油3%,食鹽2%,濃魚(yú)肝油100滴(含維生素A1.7×105u、維生素D1.7×104u),每天飼喂適量的新鮮黃豆芽。8周后將造模成功的動(dòng)物隨機(jī)分5組(n=10),分組給藥,模型對(duì)照組(5ml生理鹽水)、陽(yáng)性對(duì)照組(給予蘆薈減肥茶60mg/kg)、高劑量組(防風(fēng)通圣丸500mg/kg)、中劑量組(防風(fēng)通圣丸350mg/kg)、低劑量組(防風(fēng)通圣丸200mg/kg)。灌胃給藥,每天1次,連續(xù)6周。
1.6、觀察指標(biāo)
(1.6.1)體重和Lee's指數(shù)每周測(cè)1次體重及體長(zhǎng),并且計(jì)算Lee's指數(shù)。Lee's指數(shù)=體重(g)1/3×103/體長(zhǎng)(cm)。(體長(zhǎng):從大鼠鼻尖到肛門(mén)的長(zhǎng)度)。
(1.6.2)血清指標(biāo)的測(cè)定分離血清,測(cè)定甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)和血糖。
(1.6.3)體脂濕重剖腹取出大鼠體內(nèi)脂肪(腹腔內(nèi)脂肪、睪丸、子宮及腎周圍脂肪墊),稱其濕重。
(1.6.4)脂肪細(xì)胞大小在剝離出的脂肪組織中取一小塊,用10%甲醛固定,石蠟包埋切片,HE染色,酒精梯度脫水,在400倍顯微鏡下計(jì)數(shù)全視野中脂肪細(xì)胞數(shù),并用測(cè)微器測(cè)脂肪細(xì)胞大小。每張切片計(jì)數(shù)10個(gè)視野的細(xì)胞數(shù)、測(cè)量10個(gè)細(xì)胞的直徑,取平均值作為每例的數(shù)值。
(1.6.5)統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn)。
(2.1)對(duì)大鼠體重的影響造模8周后,模型對(duì)照組與正常對(duì)照組比較大鼠體重、體內(nèi)脂肪、Lee's指數(shù)均有顯著增加(P<0.01),見(jiàn)表1。防風(fēng)通圣丸灌胃給藥后能使肥胖動(dòng)物的體重、脂肪重量和Lee's指數(shù)均顯著下降,且隨著劑量的增大,作用增強(qiáng),呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。表1肥胖高脂飼料對(duì)大鼠體重的影響注:與正常對(duì)照組比較:##P<0.01,#P<0.05。防風(fēng)通圣丸灌胃給藥對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠的影響注:與模型對(duì)照組比較:**P<0.01,*P<0.05。
(2.2)防風(fēng)通圣丸灌胃給藥對(duì)大鼠脂肪細(xì)胞大小的影響400倍鏡下,模型對(duì)照組大鼠脂肪細(xì)胞明顯增大,鏡下脂肪細(xì)胞數(shù)減少,提示其脂肪細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積;給藥組單個(gè)視野脂肪細(xì)胞變小,脂肪細(xì)胞數(shù)量多于模型對(duì)照組,細(xì)胞直徑分別小于模型對(duì)照組,鏡下脂肪細(xì)胞數(shù)增多,差異有顯著性,以防風(fēng)通圣丸高劑量組作用最顯著。防風(fēng)通圣丸對(duì)肥胖大鼠脂肪細(xì)胞形態(tài)的影響注:與模型對(duì)照組比較,**P<0.01,*P<0.05。
(2.3)防風(fēng)通圣丸灌胃給藥對(duì)模型大鼠血清指標(biāo)的影響由表4可以看出,給藥后,肥胖動(dòng)物的血脂、甘油三脂和血糖均有所降低,其中與模型對(duì)照組相比,血糖明顯下降(P<0.01),差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,血脂、甘油三脂與對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
(2.4)防風(fēng)通圣丸灌胃給藥對(duì)模型大鼠肝、腎功能的影響由表5可以看出,該藥對(duì)動(dòng)物的肝、腎的功能無(wú)明顯的不良影響。表4防風(fēng)通圣丸對(duì)肥胖大鼠體重TC、TG、血糖的影響注:與模型對(duì)照組比較,防風(fēng)通圣丸對(duì)肥胖大鼠肝、腎功能的影響注:與模型對(duì)照組比較。
(2.5)防風(fēng)通圣丸灌胃給藥對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化面積的影響經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),本藥對(duì)動(dòng)脈硬化無(wú)縮小面積的作用。
單純性肥胖癥指體內(nèi)脂肪堆積過(guò)多和(或)分布異常、體重增加,是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果[6~9],且隨著年齡增加,常伴有高血壓、高血脂等,而高血脂又易引起血栓和動(dòng)脈硬化等并發(fā)癥。中藥減肥因長(zhǎng)期服用副作小、療效肯定,越來(lái)越受到肥胖癥求美者的青睞。防風(fēng)通圣丸是金元時(shí)期醫(yī)學(xué)家劉元素所創(chuàng)名方,由防風(fēng)、川芎、當(dāng)歸、芍藥、大黃、薄荷、麻黃、連翹、芒硝、生石膏、黃芩、桔梗、滑石、甘草、荊芥、白術(shù)、梔子等17味中藥組成,具有解表通里、清熱解毒的功效,主治外寒內(nèi)熱,表里俱實(shí)之證。方中防風(fēng)、荊芥、石膏、黃芩等解表清熱,大黃、芒硝攻下,當(dāng)歸、川芎等補(bǔ)血活血,一方面能促進(jìn)體內(nèi)物質(zhì)的代謝、異化,另一方面能減少物質(zhì)的吸收、同化,用于治療高脂血癥,能促進(jìn)和提高脂質(zhì)代謝水平,改善和調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝與紊亂。20世紀(jì)80年代,日本學(xué)者應(yīng)用此方治療4例肥胖癥患者,體重減輕l0%,認(rèn)為其有能發(fā)汗通便,加速新陳代謝產(chǎn)物排泄及脂肪排除的功效,并推斷該方減肥機(jī)制可能主要是對(duì)脂肪的分解作用,而對(duì)蛋白質(zhì)的影響較小?,F(xiàn)代研究證明,防風(fēng)通圣丸減肥的作用機(jī)制之一是通過(guò)活化棕色脂肪組織(BAT)而引起體重的減輕。認(rèn)為可能主要是抑制了外源性膽固醇的吸收所致,與臨床上肥胖癥除了遺傳因素之外,過(guò)多攝食動(dòng)物性脂肪是其高膽固醇血癥形成的主要原因之一有很重要的實(shí)際意義。本組30只單純性肥胖動(dòng)物經(jīng)防風(fēng)通圣丸治療2個(gè)月,其體重、體內(nèi)脂肪、TC、TG、血糖,均有明顯降低,尤其在血糖方面,作用顯著,且對(duì)肝腎功能影響較小,不良反應(yīng)較少。該藥有市售丸劑,服用方便,可作為肥胖求美者推薦用藥,有治療、預(yù)防保健的雙重作用。