材料

1 藥物鼻淵舒口服液的制備，由成都華神制藥廠生產(chǎn)，主要由黃芩、龍膽草、白芷、柴胡、蒼耳子、辛夷、黃芪、川芎等組成。稀化粘素，德國(guó)保時(shí)佳大藥廠生產(chǎn)， 進(jìn)口注冊(cè)證號(hào)：X980578。青霉素V鉀片，長(zhǎng)春市新安制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：133589。2 動(dòng)物 SD大鼠90只，一級(jí)動(dòng)物，體重200～250 g，3月齡，雌雄各半，四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管第70號(hào)。飼養(yǎng)于成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥理實(shí)驗(yàn)中心，室內(nèi)溫度由空調(diào)控制在20～25℃。

3 試劑TNF-α（N-19）一抗購(gòu)自Santa Cruz Biotechnology 公司，其二抗以及試劑盒購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司。

方法

1 動(dòng)物分組 自由喂養(yǎng) 1 周后，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為①中藥高劑量組；②中藥中劑量組；③中藥低劑量組；④西藥1（稀化粘素）組；⑤西藥2（青霉素V鉀）組；⑥西藥+中藥組；⑦模型組；⑧假模型組；⑨空白組。每組10只，共90只。2 急性鼻竇炎大鼠模型 依據(jù)Y. Ge1的方法制造模型改進(jìn)。腹腔注射鹽酸氯胺酮5 mg/100 g體重,必要時(shí)用一般劑量重復(fù) 1 次，做全麻。用鹽酸利多卡因20 mg/ml,配腎上腺素0.012 5 mg，作鼻背下注射麻醉。剃毛，用碘伏消毒備皮，在面中線上中1/3交界處旁開3 mm以45°角進(jìn)針1.5 mm置石蠟適量于內(nèi)封口；然后塞入適量帶有金黃色葡萄球菌的明膠海綿于內(nèi)，由于是微創(chuàng)，不必縫合。以上過程應(yīng)在顯微鏡下操作，以確保動(dòng)作到位。假模型組造模方法同上，但注入明膠海綿的不是金黃色葡萄球菌，而是生理鹽水。

給藥情況

從造模成功后的第1天開始灌胃，療程時(shí)間為7 d，灌胃情況如下：

（1）中藥高劑量組 每日以相當(dāng)于臨床成人劑量20倍的鼻淵舒口服液〔相當(dāng)于鼻淵舒口服液10 ml/(kg·d）-1〕灌胃，分早晚兩次灌服。

（2 ）中藥中劑量組 每日以相當(dāng)于臨床成人劑量10倍的鼻淵舒口服液〔相當(dāng)于鼻淵舒口服液5 ml/(kg·d）-1〕灌胃，分早晚兩次灌服。

（3） 中藥低劑量組 每日以相當(dāng)于臨床成人劑量5倍的鼻淵舒口服液〔相當(dāng)于鼻淵舒口服液2.5 ml/(kg·d）〕灌胃，分早晚兩次灌服。

（4 ）西藥1組每日以相當(dāng)于臨床成人劑量5倍的稀化粘素〔相當(dāng)于稀化粘素75 mg/（kg·d）〕灌胃，分早晚兩次灌服。

（5 ）西藥2組每日以相當(dāng)于臨床成人劑量5倍的青霉素V鉀〔相當(dāng)于青霉素V鉀 125 mg/（kg·d）〕；灌胃，分早晚兩次灌服。

（6） 假模型組每日以與用藥組等容（2 ml/d）的生理鹽水灌胃，分早晚兩次灌服。

（7 ）模型組每日以與用藥組等容（2 ml/d）的生理鹽水灌胃，分早晚兩次灌服。

（8 ）空白組不灌胃

（9 ）中藥+西藥組每日以臨床成人劑量6倍的鼻淵舒口服液（濃度0.815 925 g/ml）2～3 ml和含藥量相當(dāng)于150 mg·kg-1·d-1的青霉素與稀化粘素灌胃，分早晚二次灌服。給藥方法參照《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法》。

檢測(cè)方法首先要及時(shí)把取下的鼻黏膜放在固定液中保存，經(jīng)脫鈣后，按照下列步驟進(jìn)行：①石蠟切片脫蠟至水，用PBS液（0.01 mol/L pH7.4）沖洗3次×5 min。②3%H2O2室溫孵育10 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性,室溫下孵育10 min。③蒸餾水沖洗，PBS浸泡5 min。④10%的正常山羊血清（PBS稀釋）封閉，室溫孵育10 min。傾去血清，勿洗，滴加1：100比例稀釋的一抗，37℃孵育1 h。⑤PBS沖洗，5 min×3次。⑥滴加第二代生物素標(biāo)記二抗工作液，37℃或室溫孵育30 min。⑦PBS沖洗，5 min×3次。⑧滴加第二代辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37℃孵育30 min。⑨PBS沖洗，5 min×3次。⑩顯色劑顯色（DAB或AEC）。然后用自來水充分沖洗，蘇木精復(fù)染，封片。用顯微鏡結(jié)合計(jì)算機(jī)圖形圖像分析系統(tǒng)，在200×光鏡下，隨機(jī)選取3個(gè)視野進(jìn)行面積、積分光密度、平均黑度的測(cè)量。計(jì)量資料以±s表示，用SPSS13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析。

結(jié)果

模型組大鼠鼻黏膜TNF-α積分光密度、平均光密度分別與測(cè)量視野面積和的比值，明顯高于正常對(duì)照組（P<0.01）；平均黑度值明顯低于正常對(duì)照組（P<0.01）；但黃染面積與面積總和的比值無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與空白組相比：①積分光密度/面積總和的比值，中藥低、中劑量組、西藥一組、假模型組無顯著性差異（P>0.05），其中以中藥低劑量組最為接近；②黃染面積/面積總和的比值，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；③平均光密度與面積總和的比值，西藥1組、中藥低劑量組、西藥2組無顯著性差異（P>0.05）。④平均黑度，中藥低、中組，西藥1，2組無顯著性差異（P>0.05）。結(jié)果見表1。