破碎細胞提取蛋白質(zhì)的同時可釋放出蛋白酶，這些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質(zhì)不被降解。在蛋白質(zhì)提取過程中，需要加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解。以下列舉了5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點，因為各種蛋白酶對不同蛋白質(zhì)的敏感性各不相同，因此需要調(diào)整各種蛋白酶的濃度。由于蛋白酶抑制劑在液體中的溶解度極低，尤其應注意在緩沖液中加人蛋白酶抑制劑時應充分混勻以減少蛋白酶抑制劑的沉淀。

PMSF1)抑制絲氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巰基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);

2)10mg/ml溶于異丙醇中;

3)在室溫下可保存一年;

4)工作濃度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L);

5)在水液體溶液中不穩(wěn)定，必須在每一分離和純化步驟中加入新鮮的PMSF。 EDTA

1)抑制金屬蛋白水解酶;

2)0.5mol/L水溶液，pH8~9;

3)溶液在4℃穩(wěn)定六個月以上;

4)工作濃度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);

5)加入NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值，否則EDTA不溶解。

胃蛋白酶抑制劑(pepstantin)

l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管緊張肽原酶，組織蛋白酶D和凝乳酶;

2)1mg/ml溶于甲醇中;

3}儲存液在4℃一周內(nèi)穩(wěn)定，-20℃穩(wěn)定6個月;

4)1作濃度:0.7ug/ml(1umol/L)

5)在水中不溶解。

亮抑蛋白酶肽(leupeptin)

1)抑制絲氨酸和巰基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血漿酶和組織蛋白酶B;

2)lOmg/ml溶于水;

3)儲存液4℃穩(wěn)定一周，-20℃穩(wěn)定6個月;

4)工作濃度0.5mg/ml。

胰蛋白酶抑制劑(aprotinin)

1)抑制絲氨酸蛋白酶，如血漿酶，血管舒緩素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶;

2)lOmg/ml溶于水，pH7~8

3}儲存液4℃穩(wěn)定一周，-20℃穩(wěn)定6個月;

4)工作濃度:0.06~2.0ug/ml(0.01~0.3umol/L);

5)避免反復凍融:

6)在pH>12.8時失活。

蛋白酶抑制劑混合使用35ug/ml PMSF………………………絲氨酸蛋白酶抑制劑

0.3mg/ml EDTA……………………金屬蛋白酶抑制劑

0.7ug/ml胃蛋白酶抑制劑(Pepstatin)…………酸性蛋白酶抑制劑

0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)…………廣譜蛋白酶抑制劑