方法名稱：

導赤丸－鹽酸小檗堿的測定－薄層掃描法

應用范圍：

本方法采用薄層掃描法測定導赤丸中鹽酸小檗堿的含量。

本方法適用于導赤丸中鹽酸小檗堿含量的測定。

方法原理：

供試品于量瓶中，加水放置使溶散，加入鹽酸－甲醇液，置水浴加熱，取出，超聲處理，放冷，加鹽酸－甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液加在中性氧化鋁柱上，以乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇溶解，制成供試液，點樣、展開，用薄層掃描儀進行熒光掃描，于激發(fā)波長λ=366 nm測量鹽酸小檗堿（C20H17NO4·HCl）熒光強度的積分值，計算其含量。

試劑：

1. 鹽酸

2 .甲醇

3 .乙醇

4 .苯

5 .醋酸乙酯

6 .異丙醇

7 .氨水

儀器設備：

1 儀器

1.1超聲提取器

1.2水浴鍋

1.3薄層掃描儀

1.4涂布器

應能使吸附劑在玻璃板上手工或自動涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.5點樣器

一般采用微升毛細管或與之相應的點樣器材。

1.6展開室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

2 材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

2.3中性氧化鋁柱（10～200目， 3g，內徑0.9cm）

試樣制備：

1. 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每 1mL含 0.025mg的溶液，作為對照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取供試品，剪碎，混勻，精密稱取約 1g，置 100mL量瓶中，加水 5mL，放置使溶散，加入鹽酸－甲醇（1：100）約80mL，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，超聲處理（功率250W、頻率33kHZ） 15分鐘，放冷，加鹽酸－甲醇（1：100）稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，加在中性氧化鋁柱（100～200目，3g，內徑0.9cm）上，以乙醇25mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至 5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟：

1. 薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進行涂布（厚度為0.25～0.5mm）取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應均勻，平整，無麻點、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，用商品預制板。

2. 點樣

精密吸取供試品溶液 4μL、對照品溶液 2μL與 4μL，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，如用點樣器點樣到薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點直徑一般不大于2mm，點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。

3. 展開

將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，以苯－醋酸乙酯－甲醇－異丙醇－水（20：10：5：5：1）為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內，展開，取出，晾干。

4. 含量測定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，進行熒光掃描，激發(fā)波長：λ=366 nm， 測量供試品熒光強度的積分值與對照品熒光強度的積分值，計算。

用外標法測定時，若對照品各數(shù)據(jù)點在校正曲線上呈一通過原點的直線時，可用一點法校正，如不通過原點通常宜采用二點法校正，必要時用多點法校正。