甾體激素C3-酮基及某些其他位置上的酮基都能在酸性條件下與羰基試劑異煙肼縮合形成黃色異煙腙，在一定波長下具有最大吸收。

　　某些具有兩個(gè)酮基的甾體激素可形成雙腙，如黃體酮、可的松和氫化可的松等。

　　本法主要用于甾體激素制劑的測定，如倍他米松軟膏、哈西奈德軟膏、倍他米松磷酸鈉及其注射液等的含量測定。

　　討論：①溶劑的選擇：只用用無水乙醇和無水甲醇才能得到滿意的結(jié)果，其他溶劑因受到異煙肼鹽酸鹽在其中溶解度的限制不能采用。

　?、谒岬姆N類和濃度以及異煙肼的濃度：當(dāng)酸與異煙肼試劑的摩爾比為2：1時(shí)可獲得最大吸收度。

　?、鬯帧囟?、光線和氧的影響：當(dāng)溶劑中含水量增高，吸收度隨之降低。溫度升高，反應(yīng)加速。當(dāng)在具塞玻管中不致使溶劑揮發(fā)及吸收水分的情況下，光與氧不影響反應(yīng)。

　?、荜P(guān)于反應(yīng)的專屬性：具有Δ4-3-酮基的甾體激素在室溫不到1h即可定量醫(yī)學(xué)教育|網(wǎng)收集整理地與酸性異煙肼反應(yīng)。其他甾酮化合物需在長時(shí)間放置或加熱后方可反應(yīng)完全，因此在上述反應(yīng)條件下，本法對(duì)Δ4-3-酮甾體具有一定的專屬性。