底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)有什么影響?
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在檢測(cè)試劑中底物濃度、輔因子、活化劑、復(fù)構(gòu)劑的種類和濃度均對(duì)酶的測(cè)定至關(guān)重要。其中以底物的種類和濃度最為重要。
底物濃度影響遵循米氏方程:
ν=V[S]/Km+[S]
當(dāng)?shù)孜餄舛冗h(yuǎn)遠(yuǎn)小于Km,增加底物濃度,反應(yīng)速度增加。
當(dāng)?shù)孜颷S]>>Km時(shí),公式近似為ν=V,反應(yīng)速度不再增加,故此時(shí)反應(yīng)速度為最大反應(yīng)V。
從理論上說(shuō)只有測(cè)定的是酶最大反應(yīng)V,反應(yīng)速度才和酶量成正比。
(1)底物的種類
若所測(cè)的酶專一性不強(qiáng),可作用于多種底物,Km最小的底物往往是此酶的生理底物。(Km表示酶和底物的親和力,Km越小親和力越大)
如該酶測(cè)定主要用于臨床診斷工作,首先應(yīng)考慮有效診斷價(jià)值的底物。
選擇Km小的底物測(cè)定酶活性,在最大反應(yīng)速度時(shí)底物濃度也將最低。這意味著試劑成本可能較低,不易出現(xiàn)底物難溶解的困難。
(2)選擇底物的合適濃度
確定底物種類后,重要的是選擇底物的合適濃度。
米氏方程在選擇酶測(cè)定底物濃度有著重要的指導(dǎo)作用。
計(jì)算出某一酶的Km后就可以計(jì)算出不同底物濃度和Km間的比值,將其代入米氏方程就可以計(jì)算出此時(shí)酶促反應(yīng)速度相當(dāng)于最大反應(yīng)速度的百分比。
上述只能適應(yīng)用于單一底物的酶。
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