PCR實(shí)驗(yàn)室的污染來源都有什么?
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①樣本間交叉污染:收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴(yán)外溢;不同樣本移液時忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖;移液器等實(shí)驗(yàn)器具及耗材未及時消毒滅菌;不同樣本同時開蓋或樣本劇烈震蕩、反復(fù)吹吸導(dǎo)致氣溶膠形成擴(kuò)散,相互交叉污染。
②實(shí)驗(yàn)試劑污染:主要是在PCR組分試劑加[醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)原創(chuàng)]樣過程中,由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。加樣過程中,因?yàn)镻CR試劑對溫度十分敏感,需要通過冰浴使得PCR試劑和PCR板/管處于OC,但這個過程也是充滿了污染的風(fēng)險(xiǎn)的。
③擴(kuò)增產(chǎn)物污染:大量拷貝的產(chǎn)物泄[醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)原創(chuàng)]漏或擴(kuò)增后的PCR反應(yīng)管意外開蓋,這是PCR反應(yīng)中最主要最常見的污染問題。因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測數(shù)個拷貝的極限,所以極微量的PCR產(chǎn)物污染,就可形成假陽性。
④克隆質(zhì)粒污染:作為陽性質(zhì)控品的克隆質(zhì)粒外溢。
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