病原學(xué)檢查

　　1.痰涂片顯微鏡檢查

　　痰標(biāo)本涂片萋一尼染色找抗酸桿菌具有快速、簡便等優(yōu)點(diǎn)。厚涂片可提高檢測(cè)陽性率。熒光染色檢查不需油鏡，視野范圍廣，敏感性高于抗酸染色，但易有假陽性。

　　抗酸染色直接鏡檢不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌（nontubercu1ous mycobacteria），但在我國非結(jié)核分枝桿菌病相對(duì)較少，涂片找到抗酸桿菌絕大多數(shù)為結(jié)核桿菌，可以提示診斷。規(guī)定觀察300個(gè)視野，油鏡下所見判斷檢驗(yàn)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)：0條／300視野（陰性）；1-2條／300視野（可疑陽性）；3～9條／100視野（+）；1～9條／10視野（++）；1～9條／視野（+++）；≥10條／視野（++++）。除了痰標(biāo)本外，膿液、病灶組織、纖支鏡刷檢物、沖洗或灌洗液均可用于直接涂片檢查。

　　2.結(jié)核菌培養(yǎng)

　　結(jié)核菌培養(yǎng)法具有很高敏感性和特異性。培養(yǎng)后可進(jìn)行藥敏測(cè)試。隨著耐多藥結(jié)核菌增多，藥敏愈顯重要。近來應(yīng)用BacteeTB460系統(tǒng)，在含放射性14 C棕櫚酸底物的Th.分枝桿菌培養(yǎng)基，由于分枝桿菌產(chǎn)生帶有放射性14C，進(jìn)行測(cè)定和推算。新的Bactee MGIT960系統(tǒng)以熒光素取代14C，可以避免核素污染。Bactec TB系統(tǒng)培養(yǎng)結(jié)核菌陽性報(bào)告時(shí)間較普通培養(yǎng)縮短10天左右，藥敏通常在培養(yǎng)陽性后的4～6天即可完成，且能快速將結(jié)核菌和非結(jié)核分枝桿菌加以鑒別。

　　3.分子生物學(xué)檢測(cè)

　　聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)可以將標(biāo)本中微量的結(jié)核菌DNA加以擴(kuò)增。一般鏡檢僅能檢測(cè)104～105條菌／毫升，而PCR可檢出1-100fg結(jié)核菌DNA（相當(dāng)于1～20條菌／毫升）。但DNA提取過程遭遇污染等技術(shù)原因可以出現(xiàn)假陽性，而且PCR無法區(qū)別活菌和死菌，故不能用于結(jié)核病治療效果評(píng)估、流行病學(xué)調(diào)查等。目前PCR檢測(cè)僅推薦在非結(jié)核分枝桿菌病高發(fā)地區(qū)涂片抗酸桿菌陽性病例用來快速區(qū)分結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌。已有商用結(jié)核菌eDNA探針，由于實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜等原因尚未在臨床上應(yīng)用。核酸指印技術(shù)（eDNA finger printing）采用限制性內(nèi)切酶片段多態(tài)性分析（restriction fragment 1ength po1ymorphism，RP1P），可用于鑒定所分離到的結(jié)核菌是否同源，用于流行病研究。

　　4.結(jié)核菌

　　抗原和抗體檢測(cè)采用E1ISA方法檢測(cè)痰標(biāo)本中結(jié)核菌抗原的結(jié)果差異甚大，可能與痰標(biāo)本中結(jié)核菌抗原分布不甚均勻有關(guān)。采用不同的抗原檢測(cè)肺結(jié)核患者血標(biāo)本中結(jié)核菌IgG的敏感性為24％-100％不等，特異性為71％-100％。我國采用PPD作為抗原檢測(cè)結(jié)核菌IgG，敏感性和特異性分別為60％-80％和90％，抗體檢測(cè)主要是用于臨床和X線影像學(xué)疑為肺結(jié)核而不易獲得痰標(biāo)本的兒童及痰涂陰性肺結(jié)核患者的診斷參考。