用品及準備

　　待檢血小板懸液，已知血小板抗體血清，離心機，U型96孔反應(yīng)板，福馬林，聚山梨酯 20，胎牛血清，兔抗人IgG，IgG抗D致敏紅細胞。

　　方法及內(nèi)容

　　1.將ACD-A與新鮮待檢血液按1：7混勻，以800r/min離心10-15min，獲得富含血小板血漿后加入該血漿量的1/10 ACD混勻，再以3000r/min離心15min，取壓積血小板用生理鹽水洗滌2次，最后配成100×10⁹/L血小板懸液。

　　2.取U型反應(yīng)板每孔加入25μl血小板懸液，水平振蕩15s以1500r/min離心反應(yīng)板5min，然后加入50μl 8％-12％的福馬林 （pH7.2磷酸鹽緩沖液稀釋甲醛），室溫溫育固定20min，然后取出反應(yīng)板，用生理鹽水洗滌5-6次。

　　3.每個反應(yīng)孔加入已知血小板抗體的血清25μl，置于室溫混勻溫育1h，用0.05％聚山梨酯20PBS洗滌反應(yīng)板6次，每個孔內(nèi)加入兔抗人IgG25μl，溫育30min，加入1％抗D致敏紅細胞25μl，反應(yīng)板置于濕盒內(nèi)靜置2h后或次日觀察結(jié)果。

　　注意事項

　　離心時溫度不能太高，以免破壞血小板抗原性；操作臺上應(yīng)加濕布，以防靜電干擾；反應(yīng)板溫育過程中，應(yīng)置于濕度適合的環(huán)境中，以防孔內(nèi)干涸影響結(jié)果判讀。