用品及準(zhǔn)備

　　5％A、B、O和Le（a+b-）紅細(xì)胞懸液，與待檢者相同，標(biāo)化的抗A、抗B、抗H、抗Lea血清，已知的分泌型和非分泌型唾液，其A、B、O型與待檢者相同。燒杯或粗口試管、煮鍋等，其他材料同ABO血型鑒定。

　　方法及內(nèi)容

　　1.唾液的留?、賹⒆匀涣鞒龅耐僖?—10ml盛入干燥清潔的容器（小燒杯、三角瓶或粗口試管等）內(nèi)，在水浴中煮沸10min（以滅活能使血型物質(zhì)不活化的唾液酶，同時(shí)也破壞常見存在于唾液中的抗A及抗B）。②以3000r/min離心10min，留取上清液備用，棄去不透明的半固態(tài)物質(zhì)。

　　2.試劑血清修正液的制備  ①取小試管分成4排，每排5支，分別標(biāo)明第1排A1～A5，第2排B1～B5，第3排H1～H5，第4排Lea1～Lea5.②各排從第2管開始，每管加生理鹽水0.1ml.③第1—4排的第1和第2管分別加抗A、抗B、抗H及抗Lea血清0.1ml，從第2管開始倍量稀釋。④于第1排各管加2％-5％的A型紅細(xì)胞鹽水懸液0.1ml；第2排各管加2％-5％的B型紅細(xì)胞鹽水懸液0.1ml；第3排各管加2％-5％的O型紅細(xì)胞鹽水懸液0.1ml；第4排各管加2％-5％的Le（a+b-）型紅細(xì)胞鹽水懸液0.1ml.⑤振搖試管架使之混勻，置室溫lh后觀察結(jié)果。每排以出現(xiàn)“4+”凝集的最高稀釋度為最適稀釋度。

　　3.唾液中血型物質(zhì)的檢測(cè)

　?。?）準(zhǔn)備唾液做陽性或陰性對(duì)照。對(duì)ABH分泌者，使用已知Se（分泌型）和sese（非分泌型）人的唾液。對(duì)Lewis分泌者，使用Lea陽性和Lea陰性人的唾液。可以用對(duì)紅細(xì)胞試驗(yàn)的結(jié)果來選擇這些對(duì)照。陽性對(duì)照應(yīng)該有Le（a+b-）的紅細(xì)胞，陰性對(duì)照應(yīng)該有Le（a-b-）的紅細(xì)胞。試劑對(duì)照用生理鹽水。（2）取4支試管，對(duì)ABH試驗(yàn)分別標(biāo)明待檢者、分泌型、非分泌型和生理鹽水。對(duì)Lewis試驗(yàn)分別標(biāo)明待檢者、Lewis陽性、Lewis陰性和生理鹽水。（3）按標(biāo)記分別加入最適稀釋度抗血清1滴。（4）在相應(yīng)的試管中加入唾液1滴，在對(duì)照管中加入生理鹽水1滴。（5）混合后在室溫孵育30min，中和抗體。（6）每管中加入5％已洗滌并與抗體相對(duì)應(yīng)的紅細(xì)胞懸液1滴。（7）混合后置室溫孵育1h或15min后，以3000r/min離心15s，觀察結(jié)果。

　　結(jié)果判讀：先看對(duì)照，分泌型對(duì)照應(yīng)不凝集，非分泌型應(yīng)凝集。待檢者若不凝集為分泌型，凝集為非分泌型。Lewis試驗(yàn)，先看對(duì)照，陽性對(duì)照應(yīng)不凝集，陰性對(duì)照凝集。待檢者不凝集為陽性，凝集者為Lea陰性。

　　4.血型物質(zhì)效價(jià)測(cè)定

　?。?）取小試管10支，依次編號(hào)。第2～10管各加入生理鹽水0.1ml.（2）第1、2管各加入待檢者唾液0.1ml，從第2管開始倍比稀釋，第10管為對(duì)照管。（3）每管加相應(yīng)的經(jīng)修正過的試劑血清（待檢者為A型，則用抗A；B型用抗B；O型用抗H；AB型用抗A和抗B；Lea+用抗Lea0.1ml，混勻后，置室溫（20℃）30min.（4）每管再加入與待檢者同型的5％紅細(xì)胞懸液一滴，混合后放置室溫（20℃）1h，觀察結(jié)果。（5）結(jié)果判讀：先看對(duì)照的第10管，然后依次看1—9管，以抑制紅細(xì)胞凝集的最后一管的稀釋倍數(shù)為該唾液中血型物質(zhì)的效價(jià)。（6）注意事項(xiàng)：①漱口后留取唾液，以免食物殘?jiān)烊耄虎跒樵黾油僖悍置冢龣z者可嚼蠟、石蠟?zāi)せ蛳鹌l，但不能嚼口香糖或其他含糖或蛋白質(zhì)的食品；③如果當(dāng)日試驗(yàn)用，血型物質(zhì)可置4℃冰箱保存；如果暫時(shí)不用，可置低溫冰箱冰凍保存，可保留其活性幾年；④每次試驗(yàn)最好備有分泌型和非分泌型唾液作對(duì)照。