免疫遺傳學(xué)研究的發(fā)展，很大程度上依賴(lài)于以分型為主要手段的HLA多態(tài)性分析。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)的小編整理了HLA的三種分型技術(shù)，希望對(duì)考生有所幫助。

1.血清學(xué)分型技術(shù)：

1）HLA-Ⅰ類(lèi)抗原的檢測(cè)

HLA-A、B、C抗原型別鑒定均借助微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)或稱(chēng)補(bǔ)體依賴(lài)的細(xì)胞毒試驗(yàn)。原理為取已知HLA抗血清加入待測(cè)外周血淋巴細(xì)胞，作用后加入免補(bǔ)體，充分作用后加入染料，在倒置顯微鏡下判斷結(jié)果，著染的細(xì)胞為死亡細(xì)胞，表示待檢淋巴細(xì)胞表面具有已知抗血清所針對(duì)的抗原。標(biāo)準(zhǔn)抗原清取自多次經(jīng)產(chǎn)婦或計(jì)劃免疫志愿者。

2）HLA-DR、DQ抗原檢測(cè)

該二抗原分型方法與HLA-Ⅰ類(lèi)抗原相同，但所用抗血清須經(jīng)過(guò)血小板吸收以去除針對(duì)Ⅰ類(lèi)抗原的抗體。另外，待測(cè)細(xì)胞須是經(jīng)純化的B細(xì)胞。

2.細(xì)胞學(xué)分型技術(shù)：

HLA-Dw特異性與HLA-DP特異性可分別通過(guò)純合分型細(xì)胞及預(yù)致敏淋巴細(xì)胞試驗(yàn)檢測(cè)。二種方法的基本原理均是判斷淋巴細(xì)胞在識(shí)別非已HLA抗原決定簇后發(fā)生的增殖反應(yīng)。由于分型細(xì)胞來(lái)源困難以及操作手續(xù)繁瑣，細(xì)胞學(xué)分型技術(shù)下正逐漸淘汰。

3.HLA的DNA分型技術(shù)

1）限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性檢測(cè)技術(shù)

這是首先建立的對(duì)多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)的DNA分析技術(shù)。個(gè)體間抗原特異性來(lái)自氨基酸順序的差別，后者由編碼基因的堿基順序不同所決定。這種堿基順序的差別造成限制性?xún)?nèi)切酶識(shí)位置及酶切位點(diǎn)數(shù)目的不同，從而產(chǎn)生數(shù)量和長(zhǎng)度不一的DNA酶切片段。用特異性探針對(duì)整個(gè)基因組DNA酶切片段進(jìn)行雜交，即可分析限制性長(zhǎng)度片段多態(tài)性。一定的內(nèi)切酶組合所得到的HLA-RFLP可以和傳統(tǒng)方法測(cè)定的HLA特異性型別相關(guān)。80年代末發(fā)展起來(lái)的PCR技術(shù)已被用于RFLP分析，即用等位特異限制酶裂解PCR擴(kuò)增的片段，然后再進(jìn)行分析，從而大提高了靈敏度。

2）PCR/SSO技術(shù)

此法乃用人工合成的HLA型別特異的寡核苷酸序列作為探針，與待檢細(xì)胞經(jīng)PCR擴(kuò)增的HLA基因片段雜交，從而確定HLA型別，PCR技術(shù)可將HLA復(fù)合體上指定基因片段特異性地?cái)U(kuò)增5～6個(gè)數(shù)量級(jí)；而專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)的SSO探針又能探測(cè)出等位基因間1～2個(gè)核苷酸的差異，故PCR/SSO技術(shù)具有靈敏度、特異性強(qiáng)、需樣本量少等優(yōu)點(diǎn)。

3）PCR/SSP技術(shù)

目前常規(guī)的HLA-DNA分型技術(shù)，包括上述的PCR/RFLP、PCR/SSO等，最終均需用標(biāo)記的特性探針與擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雜交，再分析結(jié)果。PCR/SSP方法用乃設(shè)計(jì)出一整套等位基因組特異性引物，借助PCR技術(shù)獲得HLA型別特異的擴(kuò)增產(chǎn)物，可通過(guò)電泳直接分析帶型決定HLA型別，從而大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟。

由于傳統(tǒng)方法在Ⅱ類(lèi)抗原分型方面困難較大，故上述幾種基因分析型方法目前主要用于Ⅱ類(lèi)基因座。此外，目前已建立的HLA基因分型技術(shù)還包括PCR單鏈構(gòu)像多態(tài)性分析和PCR 異源二聚體電泳多態(tài)即PCR指紋圖分析。DNA分型技術(shù)的應(yīng)用，使HLA型別分析達(dá)到了更精細(xì)的水平，并因此發(fā)現(xiàn)了更多的HLA多態(tài)性。HLA的DNA分型技術(shù)現(xiàn)已成為血清學(xué)方法的競(jìng)爭(zhēng)者，并可能在不久的將來(lái)完全取而代之。