
近年來國內外已將HLA分型技術由抗原水平發(fā)展到基因水平,醫(yī)學網(wǎng)小編現(xiàn)整理HLA的DNA分型技術如下:
1.限制性片段長度多態(tài)性檢測技術
這是首先建立的對多態(tài)性進行檢測的DNA分析技術。個體間抗原特異性來自氨基酸順序的差別,后者由編碼基因的堿基順序不同所決定。這種堿基順序的差別造成限制性內切酶識位置及酶切位點數(shù)目的不同,從而產生數(shù)量和長度不一的DNA酶切片段。用特異性探針對整個基因組DNA酶切片段進行雜交,即可分析限制性長度片段多態(tài)性。一定的內切酶組合所得到的HLA-RFLP可以和傳統(tǒng)方法測定的HLA特異性型別相關。80年代末發(fā)展起來的PCR技術已被用于RFLP分析,即用等位特異限制酶裂解PCR擴增的片段,然后再進行分析,從而大提高了靈敏度。
2.PCR/SSO技術
此法乃用人工合成的HLA型別特異的寡核苷酸序列作為探針,與待檢細胞經PCR擴增的HLA基因片段雜交,從而確定HLA型別,PCR技術可將HLA復合體上指定基因片段特異性地擴增5~6個數(shù)量級;而專門設計的SSO探針又能探測出等位基因間1~2個核苷酸的差異,故PCR/SSO技術具有靈敏度、特異性強、需樣本量少等優(yōu)點。
3.PCR/SSP技術
目前常規(guī)的HLA-DNA分型技術,包括上述的PCR/RFLP、PCR/SSO等,最終均需用標記的特性探針與擴增產物進行雜交,再分析結果。PCR/SSP方法用乃設計出一整套等位基因組特異性引物,借助PCR技術獲得HLA型別特異的擴增產物,可通過電泳直接分析帶型決定HLA型別,從而大大簡化了實驗步驟。
由于傳統(tǒng)方法在Ⅱ類抗原分型方面困難較大,故上述幾種基因分析型方法目前主要用于Ⅱ類基因座。此外,目前已建立的HLA基因分型技術還包括PCR單鏈構像多態(tài)性分析和PCR 異源二聚體電泳多態(tài)即PCR指紋圖分析。DNA分型技術的應用,使HLA型別分析達到了更精細的水平,并因此發(fā)現(xiàn)了更多的HLA多態(tài)性。HLA的DNA分型技術現(xiàn)已成為血清學方法的競爭者,并可能在不久的將來完全取而代之。