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建立和利用豬全基因組基因敲除crispr/cas9技術(shù)篩選鑒定豬流感病毒感染相關(guān)的宿主(豬)基因

2018-03-02 09:41

在豬PK15細胞系中,證實了CRISPR/Cas9系統(tǒng)在豬細胞系中能高效地誘導豬基因敲除。設(shè)計和構(gòu)建了豬全基因組基因敲除CRISPR/Cas9文庫,該文庫包含了65316個gRNAs、覆蓋了13229個基因,其中含有5個gRNAs的基因有11400個基因、含有4個gRNAs的基因有1829個,并且全部的基因都含有至少2個gRNAs(最多不超過5個gRNAs/基因)。利用該豬全基因組基因突變gRNAs文庫進行大規(guī)模的基因篩選,初步篩選出了140個候選宿主基因,并證實了其中的32個候選基因在病毒復制增殖中具有一定的調(diào)控作用。