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瘧原蟲培養(yǎng)

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  瘧原蟲培養(yǎng)可以分紅細胞內(nèi)期和紅細胞外期。紅細胞內(nèi)期培養(yǎng)中四種人體瘧原蟲僅惡性瘧原蟲可以成功地在體外長期培養(yǎng)。

  瘧原蟲培養(yǎng)比較復(fù)雜,需要“O”型人紅細胞、人血清及由3%氧氣、4%二氧化碳和93%氮氣組成的氣體充在培養(yǎng)瓶內(nèi)。當然還需要基本的培養(yǎng)液例如RPMI1640等,而且必須每天更換。整個培養(yǎng)系統(tǒng)也必須是無菌狀態(tài)的。這里例舉一種培養(yǎng)方法:取新鮮“O”型抗凝全血,離心使血清與紅細胞分離開來。

  血清按一次需要量分裝于小容量的無菌瓶或試管中,-20℃保存。紅細胞以RPMI1640洗滌三次后,懸浮在等量的含10%人血清的RPMI1640中,4℃保存,可使用2~3周。市售的RPMI1640液體培養(yǎng)液或粉末培養(yǎng)基溶解過濾滅菌后,加入HEPES和谷胱苷肽,使最終濃度分別為25mmol和0.6%,醫(yī)學(xué)教.育網(wǎng)搜集整理成為完全的RPMI1640的培養(yǎng)液。

  培養(yǎng)時取病人血,以RPMI1640洗滌2次,再加入含15%人血清的完全RPMI1640培養(yǎng)液,使再成為含量約為0.2%~0.4%的懸液。取懸液8ml置35cm2(70ml)無菌細胞培養(yǎng)瓶中,再加入紅細胞懸液,使其最終成為3%~5%紅細胞懸液,充入上述混合氣體,緊蓋瓶蓋,37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。一般24小時更換培養(yǎng)液一次。換液時盡量不晃動細胞層,不觸及紅細胞,以消毒吸管除去老培養(yǎng)液。加入等量新鮮的含15%人血清的完全RPMI1640培養(yǎng)液后再輕輕懸浮細胞,37℃繼續(xù)培養(yǎng)。同時定時吸取少量沉淀細胞涂成簿血片,姬氏染色,了解蟲體生長情況。紅細胞外期的培養(yǎng)惡性瘧原蟲和間日瘧原蟲可以成功。

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