1.試劑：0.75M ONPG溶液。

　　2.方法：從克氏雙糖鐵培養(yǎng)基上取菌，于0.25ml無菌生理鹽水中制成菌懸液，加入一滴甲苯并充分振搖，使酶釋放。將試管置37℃水浴5min，加入0.25ml ONPG試劑，水浴20min～3h觀察結(jié)果。

　　3.結(jié)果：菌懸液呈現(xiàn)黃色為陽性醫(yī)|學教育網(wǎng)搜集整理反應，一般在20～30min內(nèi)顯色。

　　4.應用：迅速及遲緩分解乳糖的細菌ONPG試驗為陽性，而不發(fā)酵乳糖的細菌為陰性。本實驗主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。