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分子生物學(xué)技術(shù)在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用

2011-01-17 11:20 來(lái)源:
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  已有許多新生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用于免疫學(xué)研究,促進(jìn)了免疫學(xué)的發(fā)展,豐富了免疫學(xué)檢測(cè)的內(nèi)容,使免疫學(xué)研究與相關(guān)疾病的診斷建立在基因水平,提高了檢測(cè)的敏感性和可靠性。

  一、分子雜交技術(shù) 分子雜交的基本原理是根據(jù)雙鏈DNA經(jīng)高溫解鏈成兩條互補(bǔ)的單鏈,降溫后又可恢復(fù)原來(lái)的雙鏈。兩條不同的單鏈分子可根據(jù)堿基配對(duì)的原則,只要它們的堿基序列同源或部分同源,即可全部或部分復(fù)性,此稱核酸雜交。用來(lái)探測(cè)DNA的已知互補(bǔ)片段稱為DNA探針,通常是應(yīng)用已預(yù)先經(jīng)放射性標(biāo)記或非放射性標(biāo)記的DNA單鏈來(lái)識(shí)別另一核酸分子中與其同源的部分,其特異性和敏感性極高。實(shí)驗(yàn)方法有印跡雜交(southern blot)、斑點(diǎn)雜交和原位雜交。目前分子雜交技術(shù)已應(yīng)用于免疫球蛋白分子、T細(xì)胞受體、補(bǔ)體、細(xì)胞因子以及MHC分子的基因結(jié)構(gòu)、功能及表達(dá)等方面的研究。

  二、轉(zhuǎn)基因技術(shù)

  轉(zhuǎn)基因技術(shù)是近年來(lái)生物技術(shù)中的一項(xiàng)重大突破。其建立使得動(dòng)物可不必通過(guò)有性雜交即能獲得新的基因。其基本原理是通過(guò)顯微注射或逆轉(zhuǎn)錄病毒,將外源性基因?qū)氩溉閯?dòng)物的受精卵或其早期胚胎,并經(jīng)分子雜交分析胚胎或其后代組織中是否有外源性基因存在及其在體內(nèi)的表達(dá)情況。目前通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)建立的轉(zhuǎn)基因鼠,已應(yīng)用于研究多種免疫分子的基因表達(dá)、自身反應(yīng)性T細(xì)胞的負(fù)選擇作用及自身耐受機(jī)制、MHC的表達(dá)與糖尿病的關(guān)系等。此外也可將分離的目的基因與載體(質(zhì)?;蚴删w)通過(guò)粘性末端結(jié)合后,轉(zhuǎn)移至原核或真核細(xì)胞,使其整合到宿主細(xì)胞DNA上,藉以生產(chǎn)重組細(xì)胞因子等,為進(jìn)一步研究免疫分子的結(jié)構(gòu)與功能及臨床疾病的診斷提供理想的制劑。

  三、多聚酶鏈反應(yīng)

  多聚酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)又稱體外核酸擴(kuò)增技術(shù),即對(duì)特定DNA片段進(jìn)行非細(xì)胞依賴性擴(kuò)增,其基本過(guò)程是將已提取的待測(cè)DNA在一對(duì)寡核苷酸引物、三磷酸核苷及耐熱DNA多聚酶存在的情況下,分別于90℃、55℃和72℃下經(jīng)變性、退火和核苷酸鏈的延伸,如此循環(huán)數(shù)十次以擴(kuò)增DNA。擴(kuò)增物經(jīng)溴乙錠染色后作凝膠電泳,再于紫外燈下觀察特定堿基對(duì)數(shù)的DNA片段,以出現(xiàn)橙紅色的電泳帶為陽(yáng)性。若需進(jìn)一步鑒定,可將凝膠分離的DNA回收再用特異性探針進(jìn)行雜交分析。

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