摘 要:目的建立一種以細菌染色體上1個已知拷貝管家基因作為基準、通過熒光定量PCR檢測其他被檢基因拷貝數(shù)的方法。
方法 利用熒光定量PCR檢測El Tor型霍亂弧菌染色體上目的基因zot與基準基因thyA的Ct(threshold cycle)值差值,根據(jù)已知拷貝數(shù)菌株N16961的兩基因Ct值之差來推算待測菌株中zot基因的拷貝數(shù)。
結(jié)果 利用thyA基因作參照,確定11株E1 Tor型霍亂弧菌中zot基因的拷貝數(shù)在1~5個之間,對較少拷貝數(shù)的檢測與Southern blot確認的相同,對多拷貝數(shù)檢測優(yōu)于Southern blot的判定。
結(jié)論 本方法可以準確檢測菌株染色體上的基因拷貝數(shù)。