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血涂片的制備-檢驗(yàn)基礎(chǔ)

2013-11-15 13:53 來源:
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尿常規(guī)檢查結(jié)果分析的目的是檢驗(yàn)技師需要了解的知識(shí),醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜索整理如下:

將血標(biāo)本均勻地涂抹在清潔干燥的載玻片上,經(jīng)染色后在顯微鏡下檢查,這是血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查的基本方法,臨床應(yīng)用很廣,特別是對各種血液病的形態(tài)學(xué)診斷很有價(jià)值。但是,如果血徐片制備不良,染色不佳,常使血細(xì)胞的形態(tài)學(xué)鑒別和診斷發(fā)生困難,甚至導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論。如血膜過厚,細(xì)胞重疊縮??;血膜太薄,白細(xì)胞多集中于邊緣。因此,制備厚薄適宜、分布均勻的血涂片是血液學(xué)檢驗(yàn)的基本技術(shù)之一。

一、載玻片的清潔

新載玻片上常有游離堿質(zhì),必須用約lmol/LHCI浸泡24h后,再用清水徹底沖洗,干燥備用。用過的載玻片可放入含適量肥皂或合成洗滌劑的清水中煮沸20min,再用熱水將肥皂和血膜洗凈,用清水反復(fù)沖洗,干燥備用。如急用載玻片,可將其置0、9乙醇中浸泡lh,用蒸餾水洗凈后,擦干或烘干備用。使用載玻片時(shí),只能手持玻片邊緣,切勿用手觸及玻片表面,以保持玻片清潔、干燥、中性、無油膩。

二、制作血涂片的標(biāo)本

血涂片既可由非抗凝的靜脈血和毛細(xì)血管血制備,也可由EDTA抗凝血制備。EDTA抗凝血中,鈣離子被螫合后,能阻止血小板聚集,推片時(shí)血小板均勻平鋪,顯微鏡下易于對血小板進(jìn)行觀察評價(jià)。但有時(shí)可觀察到因EDTA引起的紅細(xì)胞皺縮及白細(xì)胞叢集現(xiàn)象。但隨著血液分析儀的逐步普及,血標(biāo)本多為EDTA抗凝血,除作全血細(xì)細(xì)胞計(jì)數(shù)及多參數(shù)分析外,制備血涂片也非常方便,雖有上述弊端,但顯微鏡下易于發(fā)現(xiàn)。

三、血涂片的制備

血涂片的制備方法很多,如手工推片法、自動(dòng)推片法、載(蓋)玻片壓拉法、旋轉(zhuǎn)涂片法、棕黃層(buffy-coat)涂片法及厚血膜涂片法等,現(xiàn)介紹如下。

1、手工推片法 取血標(biāo)本一滴置載玻片的一端,以邊緣平滑的推片一端,從血滴前沿方向接觸血液,使血液沿推片散開,推片與載玻片保持25~30o的平面夾角,平穩(wěn)地將血向前推動(dòng),血液即在載玻片上形成一薄層血膜。將制成的血膜在空氣中揮動(dòng),使迅速干燥,以免血細(xì)胞皺縮。

一張良好的涂片,要求厚薄適宜,頭體尾分明,邊緣整齊,兩側(cè)應(yīng)留有空隙。玻片的一端應(yīng)留有貼標(biāo)簽的地方。涂片的好壞與血滴大小、推片與載片之間角度、推片時(shí)的速度有關(guān)。血滴大、角度大、速度快,則血膜厚;反之則血膜薄。血膜分布不勻,主要是推片邊緣不齊、用力不勻或載玻片不清潔所致。

2、載玻片壓拉法 取兩張貼有標(biāo)簽的載玻片備用,將血液滴于一張載玻片的近中央處,立即將另一載玻片于之貼合,四角對齊,標(biāo)簽一端一個(gè),使貼合后的玻片間留下如標(biāo)簽一樣厚的間距。先將血滴沿縱向輕壓展開,再將兩玻片橫向均勻拉開,得到兩張血膜。此法最適用于血細(xì)胞的活體染色,預(yù)先將染料滴加在玻片上,干燥后備用。涂制時(shí)先將血液與染料混染一段時(shí)間,再按上述方法制成血涂片,顯微鏡下檢查,如網(wǎng)織紅細(xì)胞的檢驗(yàn)。

3、旋轉(zhuǎn)器涂片法 旋轉(zhuǎn)涂片器的基本結(jié)構(gòu)是:在與電動(dòng)機(jī)轉(zhuǎn)軸垂直的方向裝一水平轉(zhuǎn)盤,正中夾置載玻片。徐制時(shí)將血標(biāo)本滴加在載玻片的中央,開動(dòng)旋轉(zhuǎn)涂片機(jī),在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)即可制備一張良好的血涂片。對該儀器的要求應(yīng)具有低慣性高轉(zhuǎn)矩,開動(dòng)時(shí)能立即加速(5000r/min),關(guān)機(jī)時(shí)能迅速停止(O、25s內(nèi))。使用這種儀器涂片,白細(xì)胞及紅細(xì)胞能均勻分布在玻片上,且形態(tài)保持完好。

4、棕黃層涂片法為了獲得較多的有核細(xì)胞,使用離心的方法,將EDTA抗凝血作分層離心(RCF—2260g,5min),取紅細(xì)胞層上的棕黃層(有核細(xì)胞和血小板集中層,)作標(biāo)本,用手工推制成涂片供檢查用。

5、厚血膜涂片法從指尖或耳垂取血1滴(約20ul)于載玻片中央,用推片的一角將血由內(nèi)向外旋轉(zhuǎn)涂布,制成厚薄均勻、直徑約1、5cm的圓形血膜,自然干燥后,滴加數(shù)滴蒸餾水,使紅細(xì)胞溶解,脫去血紅蛋白。傾去水后血膜呈灰白色,干后染色鏡檢。厚血膜片因取血量多,待檢成分較集中,因此特別適合于瘧原蟲、絲蟲的微絲蚴等的檢查。

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