放射免疫技術(shù)的基本原理是什么?
放射免疫技術(shù)(Radioimmunoassay, RIA)是一種利用放射性同位素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行定量測(cè)定的技術(shù)。其基本原理是基于競(jìng)爭(zhēng)性抑制反應(yīng),即已知量的放射性標(biāo)記抗原與非放射性的待測(cè)抗原競(jìng)爭(zhēng)有限數(shù)量的特異性抗體結(jié)合位點(diǎn)。當(dāng)向系統(tǒng)中加入不同濃度的未標(biāo)記抗原時(shí),它會(huì)與標(biāo)記抗原爭(zhēng)奪相同的抗體結(jié)合位點(diǎn),從而減少標(biāo)記抗原-抗體復(fù)合物的數(shù)量。通過(guò)測(cè)定反應(yīng)體系中游離態(tài)和結(jié)合態(tài)放射性標(biāo)記物質(zhì)的比例變化,可以計(jì)算出待測(cè)樣品中的抗原含量。
具體步驟如下:
1. 準(zhǔn)備一定量的特異性抗體、已知濃度的放射性標(biāo)記抗原以及未知濃度的非放射性待測(cè)抗原。
2. 將上述成分混合,在適宜條件下孵育一段時(shí)間,使抗原與抗體充分結(jié)合。
3. 分離游離態(tài)和結(jié)合態(tài)的標(biāo)記物。通常使用固相吸附法或化學(xué)沉淀法等方法實(shí)現(xiàn)分離。
4. 測(cè)定結(jié)合態(tài)放射性強(qiáng)度,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定待測(cè)樣品中目標(biāo)物質(zhì)的濃度。
由于RIA具有高靈敏度、特異性強(qiáng)等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于臨床診斷、科學(xué)研究等領(lǐng)域,特別是對(duì)于微量生物活性物質(zhì)如激素、藥物代謝產(chǎn)物及病毒抗原等的檢測(cè)。
具體步驟如下:
1. 準(zhǔn)備一定量的特異性抗體、已知濃度的放射性標(biāo)記抗原以及未知濃度的非放射性待測(cè)抗原。
2. 將上述成分混合,在適宜條件下孵育一段時(shí)間,使抗原與抗體充分結(jié)合。
3. 分離游離態(tài)和結(jié)合態(tài)的標(biāo)記物。通常使用固相吸附法或化學(xué)沉淀法等方法實(shí)現(xiàn)分離。
4. 測(cè)定結(jié)合態(tài)放射性強(qiáng)度,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定待測(cè)樣品中目標(biāo)物質(zhì)的濃度。
由于RIA具有高靈敏度、特異性強(qiáng)等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于臨床診斷、科學(xué)研究等領(lǐng)域,特別是對(duì)于微量生物活性物質(zhì)如激素、藥物代謝產(chǎn)物及病毒抗原等的檢測(cè)。
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