在免疫檢測(cè)技術(shù)中，間接ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）是一種常用的檢測(cè)方法。其基本原理是利用抗原與抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng)來(lái)檢測(cè)樣本中的目標(biāo)物質(zhì)。間接ELISA法主要分為以下幾個(gè)步驟：
1. 包被：首先將已知的抗原固定在固相載體上，例如微孔板的表面。
2. 封閉：使用非特異性蛋白質(zhì)（如牛血清白蛋白）處理包被后的微孔板，以封閉未結(jié)合的位點(diǎn)，防止非特異性結(jié)合的發(fā)生。
3. 加樣：將待測(cè)樣本加入到微孔板中，如果樣本中含有能與固相抗原發(fā)生反應(yīng)的目標(biāo)抗體，則兩者會(huì)發(fā)生結(jié)合。
4. 洗滌：去除未結(jié)合或非特異性吸附的物質(zhì)。
5. 酶標(biāo)二抗孵育：加入針對(duì)目標(biāo)抗體種屬來(lái)源的酶標(biāo)記二抗（例如辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗人IgG），此步驟中，酶標(biāo)記的二抗與已結(jié)合的目標(biāo)抗體發(fā)生反應(yīng)形成復(fù)合物。
6. 洗滌：再次去除未結(jié)合或非特異性吸附的物質(zhì)。
7. 底物顯色：加入底物溶液后，酶催化底物產(chǎn)生顏色變化，通過(guò)比色法測(cè)定吸光度值來(lái)判斷樣品中目標(biāo)抗體的存在與否及其濃度。

間接ELISA法具有較高的靈敏度和特異性，并且可以檢測(cè)多種類(lèi)型的抗體，因此被廣泛應(yīng)用于臨床診斷、疾病監(jiān)測(cè)及科學(xué)研究等領(lǐng)域。