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免疫印跡法檢測原理

2020-02-14 16:44 來源:醫(yī)學教育網(wǎng)
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關于免疫印跡法檢測原理,醫(yī)學教育網(wǎng)小編專門整理如下,請各位臨床初級檢驗技師職稱的考生仔細查看。

免疫印跡法是在蛋白質(zhì)電泳分離和抗原抗體檢測的基礎上發(fā)展起來的一項檢測蛋白質(zhì)的技術,它將SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳的高分辨力與抗原抗體反應的高特異性相結(jié)合。

第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)??乖鹊鞍讟悠方?jīng)SDS處理后帶負電荷,在聚丙烯酰胺凝膠中從陰極向陽極泳動,分子量越小,泳動速度就越快。此階段分離效果肉眼不可見(只有在染色后才顯出電泳區(qū)帶)。

第二階段為電轉(zhuǎn)移。此階段分離的蛋白質(zhì)條帶肉眼仍不可見。

第三階段為酶免疫定位。將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜(相當于包被了抗原的固相載體)依次與特異性抗體和酶標第二抗體作用后,加入能形成不溶性顯色物的酶反應底物,使區(qū)帶染色。常用的HRP底物為3,3-二氨基聯(lián)苯胺(呈棕色)和4-氯-1-萘酚(呈藍紫色)。陽性反應的條帶清晰可辨。并可根據(jù)SDS-PAGE時加入的分子量標準,確定各組分的分子量。

醫(yī)學教育網(wǎng)提供2020年臨床檢驗技師考試備考經(jīng)驗、精煉知識點以及政策動態(tài)變化!預祝各位考生都能順利通過2020年臨床檢驗技師考試!

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